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当前位置:首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Phosphoproteins > HTRF AKT TOTAL KIT - 500 PTS 总AKT检测试剂盒 - 500测试

概述


总 AKT(蛋白激酶 B)试剂盒是一款稳定可靠、即开即用的检测试剂盒,旨在监测 AKT 三种亚型的表达变化。AKT 作为一种癌基因,可调控细胞凋亡、细胞增殖、转录、细胞迁移及糖代谢过程。该试剂盒是我们磷酸化 AKT(Ser473 位点和 Thr308 位点)试剂盒的理想配套产品,可用作归一化检测工具。


工作原理

总 AKT 检测原理

总 AKT 检测可对细胞裂解液中 AKT 的表达水平进行定量分析。与蛋白质印迹法(Western Blot)不同,该检测完全基于微孔板开展,无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 AKT 检测采用两种标记抗体:一种与供体荧光团偶联,另一种与受体荧光团偶联。两种抗体均对 AKT 蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 AKT 时,加入这些抗体偶联物会使供体荧光团与受体荧光团近距离接触,进而产生荧光共振能量转移(FRET)信号。该信号强度与样品中 AKT 蛋白的浓度呈直接正相关,且可通过 “免洗涤” 检测模式评估该蛋白的表达水平。


(标注:phospho-how-it-works-total-akt-assay-principle)

总 AKT 双板检测方案

双板检测方案的流程为:先在 96 孔板中培养细胞,随后进行裂解;将裂解液转移至 384 孔低体积检测板后,再加入总 AKT 均相时间分辨荧光(HTRF)检测试剂。该方案可实现对细胞活力和汇合度的监测。


(标注:phospho-how-it-works-total-akt-2-plate-assay-protocol)

总 AKT 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 AKT 时,可在同一块微孔板中完成细胞培养、刺激和裂解操作,无需洗涤步骤。该方案专为高通量筛选(HTS)设计,既能实现实验微型化,又能保持稳定可靠的 HTRF 检测质量。


(标注:phospho-how-it-works-total-akt-1-plate-assay-protocol)


检测验证

总 AKT 用于监测 AKT(Ser473 位点)磷酸化状态

采用磷酸化 AKT(Ser473 位点)检测和总 AKT 检测的双板检测方案,用胰岛素样生长因子 - 1(IGF-1)激活 HEK293 细胞(人胚肾 293 细胞),每孔 100,000 个细胞,刺激时间为 10 分钟。正如预期结果所示,IGF-1 刺激可诱导 AKT 磷酸化水平呈剂量依赖性升高,而 AKT 的表达水平保持恒定。


(标注:assay-validation-akt-total-1)


简化通路

AKT 简化通路

AKT(又称蛋白激酶 B)在调控细胞存活与凋亡过程中发挥关键作用。这种丝氨酸 / 苏氨酸蛋白激酶受胰岛素及多种生长和存活因子调控,通过依赖渥曼青霉素(wortmannin)的通路发挥作用,该通路涉及磷脂酰肌醇 3 激酶(PI 3 激酶)。当 AKT 的 plekstrin 同源结构域(PH 结构域)与磷酸肌醇结合后,AKT 可被两种不同激酶磷酸化:PDK1(磷酸肌醇依赖性蛋白激酶 1)使 AKT 的苏氨酸 308(Thr308)位点磷酸化,mTORC2(哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物 2)使 AKT 的丝氨酸 473(Ser473)位点磷酸化,这两个位点的磷酸化共同启动 AKT 的活化过程。


(标注:phospho-pathway-akt-64nktpeg)


规格参数


其他规格

  • 应用领域(Application):细胞信号传导
  • 品牌(Brand):HTRF
  • 检测方式(Detection Modality):HTRF(均相时间分辨荧光)
  • 分子修饰类型(Molecular Modification):总蛋白(Total)
  • 产品类别(Product Group):试剂盒(Kit)
  • 样品体积(Sample Volume):16 微升(µL)
  • 运输条件(Shipping Conditions):干冰运输
  • 靶标类别(Target Class):磷酸化蛋白(Phosphoproteins)
  • 靶标物种(Target Species):人(Human)
  • 技术原理(Technology):TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移)
  • 治疗领域(Therapeutic Area):
    • 代谢 / 糖尿病(Metabolism/Diabetes)
    • 非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化(NASH/Fibrosis)
    • 肿瘤学与炎症(Oncology & Inflammation)
  • 单位规格(Unit Size):500 个检测点(500 assay points)


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