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HTRF P38 P-T180/Y182 KIT - 96 PTS

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品牌： Revvity

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概述

这款基于细胞的均相时间分辨荧光检测试剂盒（HTRF），可便捷、准确地定量检测 Thr180/Tyr182 位点磷酸化的 p38 丝裂原活化蛋白激酶（p-38-MAPK）。该试剂盒可应用于炎症、免疫应答及肿瘤学研究领域。其检测流程经过简化，适配小体积检测格式，既能用于基础研究，也可支持高通量药物筛选。

工作原理

磷酸化 p38 MAPK（Thr180/Tyr182）检测原理

磷酸化 p38 MAPK（Thr180/Tyr182）检测可特异性检测 Thr180/Tyr182 位点磷酸化的 p38 MAPK。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需使用凝胶、无需进行电泳或转膜操作。
该检测采用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。其中，第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白上的磷酸化基序，第二种抗体则可识别该蛋白（不受蛋白磷酸化状态影响）。当蛋白发生磷酸化时，会形成由两种标记抗体共同参与的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团近距离接触，进而产生荧光共振能量转移信号（FRET）。该信号强度与样本中磷酸化蛋白的浓度直接成正比，且在免清洗检测模式下，可用于评估蛋白的磷酸化状态。

phospho-p38-mapk-thr180-tyr182-assay-principle（图示：磷酸化 p38 MAPK（Thr180/Tyr182）检测原理）

磷酸化 p38 MAPK（Thr180/Tyr182）双板检测方案

双板检测方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，随后进行裂解；将裂解液转移至 384 孔小体积检测板后，加入磷酸化 p38 MAPK（Thr180/Tyr182）HTRF 检测试剂。该方案可监测细胞的存活率和融合度。

phospho-p38-mapk-thr180-tyr182-2-plate-assay-protocol（图示：磷酸化 p38 MAPK（Thr180/Tyr182）双板检测方案）

磷酸化 p38 MAPK（Thr180/Tyr182）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 p38 MAPK（Thr180/Tyr182）时，可在同一块用于细胞培养、刺激和裂解的微孔板中完成检测，无需清洗步骤。该方案专为高通量筛选（HTS）设计，可在实现实验微型化的同时，保持稳定可靠的 HTRF 检测质量。

phospho-p38-mapk-thr180-tyr182-1-plate-assay-protocol（图示：磷酸化 p38 MAPK（Thr180/Tyr182）单板检测方案）

检测验证

基于磷酸化 p38 MAPK 细胞检测的 HTRF 法与蛋白质印迹法（WB）比较

将 HeLa 细胞接种于 T175 培养瓶中，在 37°C、5% 二氧化碳条件下培养 2 天。用 10 微摩尔茴香霉素刺激细胞 15 分钟；去除细胞培养基后，加入 3 毫升补充后的裂解缓冲液，孵育 30 分钟；离心 10 分钟后，收集可溶性上清液。取等量裂解液，采用 HTRF 法与 WB 法进行平行对比检测。结果显示，HTRF 法的灵敏度优于蛋白质印迹法：HTRF 法仅需 2500 个细胞即可检测，而蛋白质印迹法需 10,000 个细胞。

assay-validation-p38-phospho-t180-y182-1（图示：磷酸化 p38 MAPK 检测验证 1）

茴香霉素对 NIH 3T3 细胞的剂量效应

将小鼠 NIH 3T3 细胞（每孔 50,000 个细胞）与不同浓度的茴香霉素在 37°C 条件下孵育 45 分钟；裂解液孵育 30 分钟后，采用双板检测方案检测磷酸化 p38 MAPK 的水平。

assay-validation-p38-phospho-t180-y182-2（图示：磷酸化 p38 MAPK 检测验证 2）

茴香霉素对 HeLa 细胞的剂量效应

将不同浓度的 HeLa 细胞（每孔 25,000 个、50,000 个和 100,000 个细胞）分别与不同浓度的茴香霉素在 37°C 条件下孵育 45 分钟；裂解液孵育 30 分钟后，采用双板检测方案检测磷酸化 p38 MAPK 的水平。

assay-validation-p38-phospho-t180-y182-3（图示：磷酸化 p38 MAPK 检测验证 3）

简化通路

磷酸化 p38 MAPK（Thr180/Tyr182）简化通路

p38 MAPK 可被多种细胞应激信号激活，包括渗透压休克、炎症细胞因子、脂多糖（LPS）、紫外线及生长因子。该蛋白参与细胞分化与凋亡过程。研究表明，活化的 p38 MAPK 可通过磷酸化激活 MAPKAP 激酶 2，同时也能磷酸化转录因子 ATF-2、Max 和 MEF2。此外，p38 MAPK 在炎症、免疫应答、凋亡、细胞分化、细胞周期调控及肿瘤发生过程中发挥关键作用。

phospho-pathway-p38-mapk-64p38peg（图示：磷酸化 p38 MAPK（Thr180/Tyr182）简化通路）

规格参数

其他规格参数

应用领域：细胞信号通路研究
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
裂解缓冲液兼容性：1 号裂解缓冲液
分子修饰类型：磷酸化
产品类别：试剂盒
样本体积：16 微升
运输条件：干冰运输
靶点类别：磷酸化蛋白
靶点物种：人、小鼠
技术平台：TR-FRET
治疗领域：心血管疾病、感染性疾病、非酒精性脂肪性肝炎 / 肝纤维化、神经科学、肿瘤学与炎症
单位规格：96 次检测

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货号：64P38PET

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