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HTRF FOXO1 TOTAL KIT - 10K PTS

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概述

总 FoxO1 细胞检测可监测总 FoxO1 水平，并用作磷酸化 FoxO1 试剂盒的归一化检测。FoxO1 是叉头框转录因子 FOXO 亚家族的成员，在胰岛素敏感组织中高表达，调控糖 / 脂代谢和应激抵抗。它还通过抑制细胞增殖发挥肿瘤抑制因子的作用。FoxO1 调控异常在糖尿病、非酒精性脂肪肝（NAFLD）等代谢紊乱疾病的发生发展中起关键作用，其功能异常还与多种癌症相关。

工作原理

总 FoxO1 检测原理

总 FoxO1 检测可对细胞裂解物中 FoxO1 的表达水平进行定量分析。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测为全板基检测，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 FoxO1 检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 FoxO1 时，添加这些偶联抗体后，供体荧光团与受体荧光团会近距离接触，进而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。信号强度与样品中目标蛋白的浓度直接成正比，且该检测采用 “无需洗涤” 的格式，为评估蛋白质表达提供了便捷手段。

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总 FoxO1 双板检测方案

双板方案流程为：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔低体积检测板，再添加总 FGFR2 HTRF 检测试剂。该方案可对细胞活力和汇合度进行监测。

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总 FoxO1 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 FGFR2 可在单个培养板中完成，该培养板同时用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。此高通量筛选（HTS）设计方案支持实验微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

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检测验证

胰岛素处理后 FoxO1 的失活

将人 HepG2 细胞和小鼠 C2C12 细胞接种并在高糖培养基中培养，随后用不同浓度的胰岛素处理 1 小时。裂解后，将细胞裂解物两次转移至低体积白色微孔板中，最后添加 HTRF 磷酸化 FoxO1 或总 FoxO1 检测抗体。孵育 4 小时后记录 HTRF 信号。在两种细胞系中，胰岛素处理均可诱导 FoxO1 的 Ser256 位点磷酸化（失活），而其表达水平保持稳定。

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细胞因子和氧化应激对 HepG2 细胞中 FoxO1 的激活作用

将人 HepG2 细胞接种并在高糖培养基中培养，随后用肿瘤坏死因子 -α/ 白细胞介素 - 1β/ 白细胞介素 - 6（TNF-α/IL-1β/IL-6）混合物或过氧化氢（H₂O₂）处理。裂解后，将可溶性细胞裂解物两次转移至低体积白色微孔板中，最后添加 HTRF 磷酸化 FoxO1 或总 FoxO1 检测抗体。结果表明，促炎细胞因子和活性氧（ROS）通过诱导 HepG2 细胞系中 FoxO1 的去磷酸化（激活）驱动代谢调控异常，而其表达水平保持稳定。

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使用 PI3K 抑制剂渥曼青霉素在胰腺 β 细胞中激活 FoxO1

将小鼠胰腺 β 细胞系 Min-6 接种并在高糖培养基中培养 3 天，随后用不同浓度的渥曼青霉素处理 1 小时。裂解后，将细胞裂解物两次转移至低体积白色微孔板中，最后添加 HTRF 磷酸化 FoxO1 或总 FoxO1 检测抗体。结果显示，渥曼青霉素可抑制 PI3K/AKT 通路，导致 Min-6 细胞系中 FoxO1 去磷酸化（激活）。FoxO1 表达水平保持稳定，表明该化合物对细胞无细胞毒性作用。

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在宫颈癌 HeLa 细胞系中使用 IGF-1 失活 FoxO1

将人 HeLa 细胞接种并在完全培养基中培养 24 小时，随后在无血清培养基中孵育过夜，再用不同浓度的胰岛素样生长因子 - 1（IGF-1）处理。裂解后，将细胞裂解物两次转移至低体积白色微孔板中，然后添加磷酸化或总 FoxO1 抗体。结果显示，生长因子 IGF-1 通过诱导 FoxO1 的 Ser256 位点磷酸化使其失活，进而促进肿瘤细胞增殖，且其表达水平保持稳定。

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基于人 HEK293 细胞的 HTRF 磷酸化及总 FoxO1 检测与 WB 对比

将 HEK293 细胞接种并在完全培养基中培养至 90% 汇合度。裂解后，通过离心收集可溶性上清液。对细胞裂解物进行系列稀释并转移至低体积白色微孔板中，然后添加 HTRF 磷酸化或总检测抗体。取等量裂解物通过蛋白质印迹法（WB）与 HTRF 法进行平行对比。结果显示，HTRF 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 2 倍；使用 HTRF 总 FoxO1 试剂盒时，其灵敏度是蛋白质印迹法的 8 倍。

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简化通路

FoxO1 简化通路

胰岛素 / IGF-1 信号通路激活 AKT 激酶，AKT 进而磷酸化 FoxO1 的 Ser256 位点，导致其在细胞质中滞留并抑制其转录活性。在此条件下，肝糖生成受抑制，脂肪生成增加，细胞增殖。相反，去磷酸化形式的 FoxO1 可转运至细胞核，诱导参与糖生成、脂解、脂肪生成抑制、应激抵抗、凋亡、自噬和炎症相关基因的转录。在促炎细胞因子、氧化应激、禁食和运动等条件下，应激蛋白 JNK 和 p38 可激活 FoxO1。

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规格参数

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容裂解缓冲液：
- 1 号裂解缓冲液
- 4 号裂解缓冲液
- 5 号裂解缓冲液
分子修饰类型：总蛋白
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：
- 人
- 小鼠
技术原理：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：
- 代谢 / 糖尿病
- 非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化
- 肿瘤学与炎症
单位规格：10,000 个检测点

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货号：64NFOPEH

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