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当前位置:首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Biomarkers > HTRF HUMAN CCL22 KIT - 500 PTS HTRF人C-C 基序趋化因子 22检测试剂盒,500测试

概述

CCL22 (C-C motif chemokine 22),以前称为巨噬细胞衍生的趋化因子 (MDC),是一种由树突状细胞 (DC)、巨噬细胞和活化的 B 淋巴细胞分泌的趋化因子。CCL22 与存在于许多不同细胞类型的 CCR4 结合。

CCL22 由 M2 巨噬细胞分泌,有助于 Th2 反应,例如吞噬作用、组织修复和伤口愈合。

通过与 CCR4 的结合,CCL22 也被证明有助于特应性疾病的发病机制,如哮喘和特应性皮炎 (AD)。

血清样本的评估通常需要提高敏感性。在某些情况下,AlphaLISA 检测可能具有足够的灵敏度,能够检测血清或血浆中低水平的分析物。检测时,请始终遵循推荐的方案,避免使用高度溶血的样品。

规格

运输条件
以干冰运输
单位面积
500 个检测点


运作方式

检测原理

将细胞上清液、样品或标准品直接分配到检测板中,以便通过 HTRF® 试剂(384 孔低容量白板或 20 μl 的 Revvity 低容量 96 孔板)进行检测。用 HTRF 供体和受体标记的抗体经过预混合,并在单个分液步骤中添加,以进一步简化检测程序。该分析可在最大 1536 孔规格中运行,只需按比例调整每个添加体积的大小即可。

how-it-works_assay-protocol
检测数据分析

通常建议使用 4 参数 Logistic (4PL) 曲线拟合 ELISA 标准曲线。与线性分析相比,这种回归能够在更广泛的浓度范围内准确测量未知样品,使其非常适合分析细胞因子释放等生物系统。要充分了解如何处理 HTRF 数据处理以及 4PL 1/y² 拟合,请访问此页面。Cisbio 还与 Myassays.com 合作,帮助您进行数据分析。通过单击此链接,您将能够访问免费的在线软件来运行 CCL22 分析。

 

检测详情

人 CCL22 试剂盒的技术规格
样本量16 微升
最终检测体积
20 微升
套件组件
冻干标准、冷冻检测抗体、缓冲液和实验方案。
LOD 和 LOQ(以稀释剂为单位)5.7 pg/mL & 7.9 pg/mL
LOD 和 LOQ(以 RPMI 为单位)9.8 pg/mL & 16.8 pg/mL
LOD 和 LOQ(在 DMEM 中)7.7 pg/mL & 13.8 pg/mL
范围35 – 4,000 pg/mL
出结果时间
4 小时至 RT 过夜
物种仅限人类

 

分析性能

测定内和测定间

批内 (n=24)

样本平均值 [CCL22] (pg/mL)简历
15849%
22844%
31397%

平均 CV6%


对 3 个样品中的每一个测量 24 次,并计算每个样品的 % CV。

批间 (n=4)

样本平均值 [CCL22] (pg/mL)简历
15607%
23969%

平均 CV9%


在 4 个不同的实验中测量每个样品,并计算每个样品的 % CV。

稀释线性
样本稀释因子[CCL22] 预期 (pg/mL)检测到 [CCL22] (pg/mL)恢复
11-584-
229228497%
414213998%

意味 着
97%
21-1168
2584584100%
429226290%

意味 着
95%


从这些实验中获得的出色回收率表明分析具有良好的线性。

尖峰恢复

将不同量的重组细胞因子 (P1 、 P2 或 P3) 添加到 2 个不同的 PBMC 上清液刺激样品 (S1 和 S2) 中。

将从标准曲线获得的响应集与计算的预期值进行比较。观察到的 ~ 100% 回收率验证了用于该分析的样品基质。

RPMIC recomb prot (pg/ml)预期 C (pg/ml)获得的 C (pg/ml)% 回收率
S1 本机0-596-
S1-P1 加标8451440152095%
S1-P2 尖峰401997104096%
S1-P3 尖峰16776381793%
意味 着95%
S2 本机0-350-
S2-P1 加标84511941096109%
S2-P2 加标401751734102%
意味 着105%
 

检测验证

PHA-P 和 PHA-M 刺激的 PBMC 细胞中 CCL22 的分泌

以 200 和 300 kcells/孔接种的 PBMC 细胞分别用 PHA-P 和 PHA-M 刺激 72 h,使用浓度为 10 μg/mL。

然后将 16 μL 上清液转移至白色检测板(384 小体积)中,加入 4 μL HTRF 人 CCL22 检测试剂。在室温下孵育过夜后记录 HTRF 信号。

在 RPMI 中制备的标准曲线允许估计每个样品中的 CCL22 浓度。结果显示,PHA-M 比 PHA-P 刺激更多的 CCL22 分泌。在未刺激的样品中检测到少量 CCL22。

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使用其他技术进行校准

用 10 μg/mL 的 PHA-P 刺激不同密度的 PBMC 细胞 48 或 72 h。使用 HTRF 人 CCL22 检测试剂盒、AlphaLISA 人 CCL22 检测和 ELISA 测定估计不同样品(纯和稀释)的 CCL22 浓度。

对于 HTRF 检测,然后将 16 μL 不同的细胞上清液转移至白色检测板(384 小体积)中,并加入 4 μL HTRF 人 CCL22 检测试剂。在室温下孵育过夜后记录 HTRF 信号。

对于 AlphaLISA 检测,将 5 μL 细胞上清液转移至灰色检测板(384w 板)中,并加入 45 μL 检测试剂。在室温下孵育 3 小时后记录 AlphaLISA 计数。

AlphaLISA 人 CCL22 检测试剂盒和 HTRF 人 CCL22 检测试剂盒对每个样品给出了相同的浓度估计值,而 ELISA 测定估计的浓度值仅为 HTRF 和 AlphaLISA 测定估计浓度值的一半。

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