品牌: Revvity
CCL22 (C-C motif chemokine 22),以前称为巨噬细胞衍生的趋化因子 (MDC),是一种由树突状细胞 (DC)、巨噬细胞和活化的 B 淋巴细胞分泌的趋化因子。CCL22 与存在于许多不同细胞类型的 CCR4 结合。
CCL22 由 M2 巨噬细胞分泌,有助于 Th2 反应,例如吞噬作用、组织修复和伤口愈合。
通过与 CCR4 的结合,CCL22 也被证明有助于特应性疾病的发病机制,如哮喘和特应性皮炎 (AD)。
血清样本的评估通常需要提高敏感性。在某些情况下,AlphaLISA 检测可能具有足够的灵敏度,能够检测血清或血浆中低水平的分析物。检测时,请始终遵循推荐的方案,避免使用高度溶血的样品。
将细胞上清液、样品或标准品直接分配到检测板中,以便通过 HTRF® 试剂(384 孔低容量白板或 20 μl 的 Revvity 低容量 96 孔板)进行检测。用 HTRF 供体和受体标记的抗体经过预混合,并在单个分液步骤中添加,以进一步简化检测程序。该分析可在最大 1536 孔规格中运行,只需按比例调整每个添加体积的大小即可。 通常建议使用 4 参数 Logistic (4PL) 曲线拟合 ELISA 标准曲线。与线性分析相比,这种回归能够在更广泛的浓度范围内准确测量未知样品,使其非常适合分析细胞因子释放等生物系统。要充分了解如何处理 HTRF 数据处理以及 4PL 1/y² 拟合,请访问此页面。Cisbio 还与 Myassays.com 合作,帮助您进行数据分析。通过单击此链接,您将能够访问免费的在线软件来运行 CCL22 分析。 批内 (n=24) 批间 (n=4) 将不同量的重组细胞因子 (P1 、 P2 或 P3) 添加到 2 个不同的 PBMC 上清液刺激样品 (S1 和 S2) 中。 将从标准曲线获得的响应集与计算的预期值进行比较。观察到的 ~ 100% 回收率验证了用于该分析的样品基质。 以 200 和 300 kcells/孔接种的 PBMC 细胞分别用 PHA-P 和 PHA-M 刺激 72 h,使用浓度为 10 μg/mL。 然后将 16 μL 上清液转移至白色检测板(384 小体积)中,加入 4 μL HTRF 人 CCL22 检测试剂。在室温下孵育过夜后记录 HTRF 信号。 在 RPMI 中制备的标准曲线允许估计每个样品中的 CCL22 浓度。结果显示,PHA-M 比 PHA-P 刺激更多的 CCL22 分泌。在未刺激的样品中检测到少量 CCL22。 用 10 μg/mL 的 PHA-P 刺激不同密度的 PBMC 细胞 48 或 72 h。使用 HTRF 人 CCL22 检测试剂盒、AlphaLISA 人 CCL22 检测和 ELISA 测定估计不同样品(纯和稀释)的 CCL22 浓度。 对于 HTRF 检测,然后将 16 μL 不同的细胞上清液转移至白色检测板(384 小体积)中,并加入 4 μL HTRF 人 CCL22 检测试剂。在室温下孵育过夜后记录 HTRF 信号。 对于 AlphaLISA 检测,将 5 μL 细胞上清液转移至灰色检测板(384w 板)中,并加入 45 μL 检测试剂。在室温下孵育 3 小时后记录 AlphaLISA 计数。 AlphaLISA 人 CCL22 检测试剂盒和 HTRF 人 CCL22 检测试剂盒对每个样品给出了相同的浓度估计值,而 ELISA 测定估计的浓度值仅为 HTRF 和 AlphaLISA 测定估计浓度值的一半。 规格
运输条件 以干冰运输单位面积 500 个检测点运作方式
检测原理
检测数据分析
检测详情
人 CCL22 试剂盒的技术规格
样本量 16 微升 最终检测体积
20 微升套件组件
冻干标准、冷冻检测抗体、缓冲液和实验方案。LOD 和 LOQ(以稀释剂为单位) 5.7 pg/mL & 7.9 pg/mL LOD 和 LOQ(以 RPMI 为单位) 9.8 pg/mL & 16.8 pg/mL LOD 和 LOQ(在 DMEM 中) 7.7 pg/mL & 13.8 pg/mL 范围 35 – 4,000 pg/mL 出结果时间
4 小时至 RT 过夜物种 仅限人类 分析性能
测定内和测定间
样本 平均值 [CCL22] (pg/mL) 简历 1 584 9% 2 284 4% 3 139 7% 平均 CV 6%
对 3 个样品中的每一个测量 24 次,并计算每个样品的 % CV。样本 平均值 [CCL22] (pg/mL) 简历 1 560 7% 2 396 9% 平均 CV 9%
在 4 个不同的实验中测量每个样品,并计算每个样品的 % CV。稀释线性
样本 稀释因子 [CCL22] 预期 (pg/mL) 检测到 [CCL22] (pg/mL) 恢复 1 1 - 584 - 2 292 284 97% 4 142 139 98% 意味 着 97% 2 1 - 1168 2 584 584 100% 4 292 262 90% 意味 着 95%
从这些实验中获得的出色回收率表明分析具有良好的线性。尖峰恢复
RPMI C recomb prot (pg/ml) 预期 C (pg/ml) 获得的 C (pg/ml) % 回收率 S1 本机 0 - 596 - S1-P1 加标 845 1440 1520 95% S1-P2 尖峰 401 997 1040 96% S1-P3 尖峰 167 763 817 93% 意味 着 95% S2 本机 0 - 350 - S2-P1 加标 845 1194 1096 109% S2-P2 加标 401 751 734 102% 意味 着 105%
检测验证
PHA-P 和 PHA-M 刺激的 PBMC 细胞中 CCL22 的分泌
使用其他技术进行校准