概述

人源 c-Myc 蛋白是一种多功能转录因子，在细胞周期进程、细胞凋亡及细胞转化过程中发挥作用。此外，c-Myc 还可通过调控组蛋白乙酰化来调节整体染色质结构。本试剂盒旨在特异性且快速地定量检测细胞中的 c-Myc 原癌基因（表达产物）。

工作原理

检测原理

人源 c-Myc 检测采用双抗夹心免疫分析法，该方法使用两种特异性抗人源 c-Myc 抗体，一种标记有铕 - 穴状化合物（供体），另一种标记有 d2（受体）。检测信号的强度与样本中 c-Myc 的浓度呈正比。该检测方案针对 384 孔板格式进行了优化，同时也可轻松实现进一步的微型化或规模放大。检测仅需少量样本，且检测试剂可预先混合后通过单次加样完成直接检测，全程无需任何洗涤步骤。（图示：63adk053peh1.svg，人源 c-Myc 检测原理相关图示）

检测方案

双板检测方案

以下为人体 c-Myc 检测的具体方案：将细胞接种到 96 孔培养板中，在同一培养板内完成刺激与裂解操作；随后将裂解液转移至检测板中，使用均相时间分辨荧光（HTRF）试剂进行人源 c-Myc 检测。该方案可对细胞活力与融合度进行监测。标记有 HTRF 荧光团的抗体可预先混合，通过单次加样完成添加，进一步简化检测流程。只需按比例调整各试剂的添加体积，该检测即可在 96 孔板至 384 孔板中开展。（图示：63adk053peh2.svg，人源 c-Myc 检测方案相关图示）

检测验证

HTRF 检测与蛋白质印迹法（Western Blot）的对比

将 HeLa 细胞接种于 T175 培养瓶中，在 37°C、5% 二氧化碳（CO₂）条件下培养 48 小时。移除培养基后，加入 3 毫升添加了补充剂的裂解缓冲液，在室温下裂解细胞 45 分钟。使用添加了补充剂的裂解缓冲液对细胞裂解液进行系列稀释，取 10 微升各稀释度的裂解液，分别通过蛋白质印迹法和 HTRF 法进行平行检测分析。结果显示，使用 HTRF 法检测 c-Myc 时，仅需 1000 个细胞即可检测到最低信号；而蛋白质印迹法需 4000 个细胞才能产生可检测信号。由此可见，HTRF 法检测 c-Myc 的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 4 倍。（图示：assay-validation-human-c-myc-cell-based-3.svg，人源 c-Myc 检测中 HTRF 法与蛋白质印迹法对比相关图示）

多种人源细胞系中的 c-Myc 检测

将 10 万个 MCF7、A549、HeLa、HTC116 和 HEK293T 人源细胞分别接种到 96 孔板中，加入细胞培养基后在 37°C、5% CO₂条件下培养 24 小时。移除细胞培养基，加入 50 微升裂解缓冲液，在室温下轻轻振荡 30 分钟以裂解细胞。取 10 微升裂解液转移至 384 孔低体积（sv）白色微孔板中，再加入 10 微升 HTRF c-Myc 检测试剂，孵育过夜后记录 HTRF 信号。（图示：assay-validation-human-c-myc-cell-based-4.svg，多种人源细胞系中 c-Myc 检测相关图示）

溴结构域相互作用抑制剂的作用（检测）

将 4 万个 HeLa 细胞接种到 96 孔板中，加入细胞培养基后在 37°C、5% CO₂条件下培养 24 小时。加入不同浓度的 JQ1（一种溴结构域抑制剂）孵育 24 小时后，移除培养基，加入 50 微升裂解缓冲液，在室温下轻轻振荡 45 分钟以裂解细胞。取 10 微升裂解液转移至 384 孔低体积白色微孔板中，再加入 10 微升 HTRF c-Myc 检测试剂，孵育过夜后记录 HTRF 信号。（图示：assay-validation-human-c-myc-cell-based-5.svg，溴结构域相互作用抑制剂对 c-Myc 影响检测相关图示）

组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂的作用（检测）

将 4 万个 HeLa 细胞接种到 96 孔板中，加入细胞培养基后在 37°C、5% CO₂条件下培养 24 小时。加入不同浓度的 TSA（曲古抑菌素 A，一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂）孵育 24 小时后，移除培养基，加入 50 微升裂解缓冲液，在室温下轻轻振荡 45 分钟以裂解细胞。取 10 微升裂解液转移至 384 孔低体积白色微孔板中，再加入 10 微升 HTRF c-Myc 检测试剂，孵育过夜后记录 HTRF 信号。（图示：assay-validation-human-c-myc-cell-based-6.svg，组蛋白去乙酰化酶抑制剂对 c-Myc 影响检测相关图示）

细胞生长抑制剂的作用（检测）

将 1 万个 HeLa 细胞或 A549 细胞分别接种到 96 孔板中，加入细胞培养基后在 37°C、5% CO₂条件下培养 24 小时。加入不同浓度的抑制剂（U0126、甲氨蝶呤、吉西他滨）孵育 72 小时后，移除培养基，加入 50 微升裂解缓冲液，在室温下轻轻振荡 45 分钟以裂解细胞。取 10 微升裂解液转移至 384 孔低体积白色微孔板中，再加入 10 微升 HTRF c-Myc 检测试剂，孵育过夜后记录 HTRF 信号。（图示：assay-validation-human-c-myc-cell-based-7.svg，细胞生长抑制剂对 c-Myc 影响检测相关图示）

规格参数

其他规格

• 应用领域（Application）：蛋白质 - 蛋白质相互作用（Protein-Protein Interaction）
• 品牌（Brand）：HTRF
• 检测方式（Detection Modality）：HTRF（均相时间分辨荧光技术）
• 产品类别（Product Group）：试剂盒（Kit）
• 样本体积（Sample Volume）：10 微升（10 µL）
• 运输条件（Shipping Conditions）：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别（Target Class）：结合分析（Binding Assay）
• 靶标物种（Target Species）：人（Human）
• 技术平台（Technology）：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移技术）
• 治疗领域（Therapeutic Area）：肿瘤学与炎症（Oncology & Inflammation）
• 单位规格（Unit Size）：10000 个检测点（10,000 assay points）