概述

泛素化蛋白（Utrophin）是一种常染色体编码的 376 千道尔顿（kDa）细胞骨架蛋白，其结构与功能均与肌营养不良蛋白（dystrophin）相似。它是一种广泛表达的蛋白质，主要作用是将细胞骨架锚定到质膜上。泛素化蛋白在发育中的肌肉中高表达，且在成熟肌肉的神经肌肉接头处富集。杜氏肌营养不良症（Duchenne's muscular dystrophy）患者体内缺乏肌营养不良蛋白，因此泛素化蛋白会发生上调，并重新分布到肌营养不良蛋白通常占据的位置。HTRF 泛素化蛋白检测试剂盒（HTRF Utrophin kit）专为快速检测细胞裂解液中的泛素化蛋白而设计。

工作原理

检测原理

泛素化蛋白的检测采用双抗夹心免疫分析法，该方法使用两种特异性抗泛素化蛋白抗体，分别标记有铕 - 穴状化合物（供体，Europium Cryptate）和 d2（受体）。检测信号的强度与样本中泛素化蛋白的浓度呈正比。（图示：1biomarkers-how-it-works-assay-principle-utrophin-63adk107peg-63adk107peh.svg，泛素化蛋白检测原理相关图示）

检测方案

泛素化蛋白检测采用双板实验方案：首先在同一培养板中完成细胞铺板、刺激处理与裂解操作；随后将裂解液转移至检测板中，进行泛素化蛋白的检测。该方案可对细胞活力与融合度进行监测。标记有均相时间分辨荧光（HTRF）荧光团的抗体可预先混合，通过单次加样步骤加入，进一步简化检测流程。只需按比例调整各试剂的添加体积，该检测即可在 96 孔板至 384 孔板中开展。（注：原文中检测方案图示 “2biomarkers-how-it-works-assay-protocol-alpha-tubulin-63adk072peg-63adk072peh.svg” 标注为 α- 微管蛋白检测方案，推测为文本错植，故保留图示编号并注明对应主题）（图示：2biomarkers-how-it-works-assay-protocol-alpha-tubulin-63adk072peg-63adk072peh.svg，泛素化蛋白检测方案相关图示）

检测验证

HeLa 细胞中泛素化蛋白的内源性水平检测

将人源 HeLa 细胞以不同细胞密度（100K、50K、25K、12.5K、6.25K、3.1K 个细胞 / 孔）接种到 96 孔板中，每孔加入 100 微升完全培养基，在 37°C、5% 二氧化碳（CO₂）条件下孵育。次日移除培养基，加入 50 微升 3 号裂解缓冲液（lysis buffer #3），在室温下轻轻振荡 30 分钟以裂解细胞。随后取 16 微升裂解液转移至低体积白色微孔板中，再加入 4 微升预混合的 HTRF 泛素化蛋白检测试剂。孵育过夜后，记录 HTRF 信号。（图示：2assay-validation-utrophin-1.svg，HeLa 细胞中泛素化蛋白内源性水平检测相关图示）

C2C12 细胞中泛素化蛋白的内源性水平检测

将小鼠源 C2C12 细胞以不同细胞密度（200K、100K、50K、25K、12.5K、6.25K 个细胞 / 孔）接种到 96 孔板中，每孔加入 100 微升完全培养基，在 37°C、5% 二氧化碳（CO₂）条件下孵育。次日移除培养基，加入 50 微升 3 号裂解缓冲液（lysis buffer #3），在室温下轻轻振荡 30 分钟以裂解细胞。随后取 16 微升裂解液转移至低体积白色微孔板中，再加入 4 微升预混合的 HTRF 泛素化蛋白检测试剂。孵育过夜后，记录 HTRF 信号。（图示：3assay-validation-utrophin-2.svg，C2C12 细胞中泛素化蛋白内源性水平检测相关图示）

规格参数

其他规格

• 应用领域（Application）：蛋白质定量（Protein Quantification）
• 品牌（Brand）：HTRF
• 检测方式（Detection Modality）：HTRF（均相时间分辨荧光技术）
• 产品类别（Product Group）：试剂盒（Kit）
• 样本体积（Sample Volume）：16 微升（16 µL）
• 运输条件（Shipping Conditions）：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别（Target Class）：生物标志物（Biomarkers）
• 技术平台（Technology）：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移技术，Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer）
• 治疗领域（Therapeutic Area）：罕见病（Rare Diseases）
• 单位规格（Unit Size）：500 个检测点（500 assay points）