结缔组织生长因子(CTGF),又称 CCN2,是一种基质细胞信号调节剂。CTGF 调控多种细胞功能,包括细胞黏附、聚集和迁移。它在多种细胞类型(如血管内皮细胞、成纤维细胞、上皮细胞和平滑肌细胞)中调节组织重塑平衡。CTGF 主要在转录水平受到调控,可被机械应力以及包括 TGFβ 在内的多种细胞因子和生长因子诱导表达。HTRF 人 CTGF 试剂盒是一种均相 “添加即检测” 试剂盒,用于测定细胞上清液中 CTGF 的分泌量。
CTGF 检测采用双抗夹心免疫分析法,涉及两种特异性抗 CTGF 抗体,分别标记 HTRF 供体染料和受体染料。信号强度与样本中 CTGF 的浓度直接成正比。(图示:human-CTGF-kit,CTGF 检测原理相关图示)
将细胞上清液、样本或标准品直接加入检测板(20 微升体系,384 孔低体积白色板),使用 HTRF 试剂检测 CTGF。标记 HTRF 供体和受体的抗体预先混合,通过单次加样步骤加入,进一步简化检测流程。(图示:human-CTGF-kit,CTGF 检测方案相关图示)
向含有已知浓度 CTGF 的 MEM+1% BSA 细胞上清液样本中,加入不同量的重组 CTGF,样本按 1:1 体积比混合。将标准曲线获得的响应值与计算的预期值进行比较,观察到的回收率验证了该检测所用的样本基质。具体结果如下:样本 1 重组 CTGF 14.02 ng/mL、天然 CTGF 15.02 ng/mL,预期浓度 29.04 pg/mL,检测浓度 34.73 pg/mL,回收率 120%;样本 2 重组 CTGF 14.02 ng/mL、天然 CTGF 22.05 ng/mL,预期浓度 36.07 pg/mL,检测浓度 39.1 pg/mL,回收率 108%;样本 3 重组 CTGF 25.19 ng/mL、天然 CTGF 16.88 ng/mL,预期浓度 42.07 pg/mL,检测浓度 42.07 pg/mL,回收率 110%。
将人 MRC5 细胞以每孔 400,000 个细胞的密度接种到 12 孔板,加入 600 微升完全 MEM 细胞培养基,在 37°C、5% 二氧化碳条件下过夜培养。随后用不同浓度的 TGFβ(0.2 至 20 ng/mL)在 600 微升 MEM+1% BSA 培养基中刺激细胞。刺激 24 小时后,取 16 微升上清液转移至白色检测板,使用人 CTGF 试剂盒进行分析,孵育过夜后记录 HTRF 信号。(图示:human-CTGF-kit,TGFβ 刺激相关检测验证图示)