HTRF CGMP KIT - 500 PTS 环鸟苷酸测量试剂盒-500测试

检测原理

该试剂盒基于竞争性形式，涉及用 Cryptate（供体）标记的特异性抗体，以及与 d2（受体）偶联的 cGMP。细胞产生的 cGMP 与 d2 标记的 cGMP 竞争结合单克隆抗 cGMP Eu Cryptate。

检测方案

cGMP 检测采用简化的方案，仅需两个孵育步骤：

- 目标化合物刺激细胞

- 使用 HTRF 试剂进行 cGMP 检测。

该方案在细胞刺激后只需要一个 1 小时的潜伏期。

图 1：将每孔 300 至 20,000 个 RFL-6 大鼠肺成纤维细胞接种在小体积 384 孔微孔板中。在存在或不存在 SNAP 和 cGMP 的情况下孵育细胞，按照标准检测方案使用 HTRF cGMP 试剂盒进行定量。

图 2：将每孔 10,000 个 RFL-6 大鼠肺成纤维细胞接种在小体积 384 孔微孔板中，并用浓度递增的 ANP 刺激。使用 HTRF cGMP 试剂盒按照标准检测方案计算 cGMP 水平。

IW-1973 的增加会增加 cGMP 的产生和 VASP 磷酸化。IW-1973 是一种 sGC 刺激剂。使用 HTRF 测定法测量 cGMP 产生和 VASP 磷酸化。

改编自 Tobin J.V， et al （2018）。IW-1973 的药理学特征，IW-1973 是一种新型可溶性鸟苷酸环化酶刺激剂，在疾病临床前模型中具有广泛的组织分布、抗高血压、抗炎和抗纤维化作用。药理学实验杂志 365（3）：664-675

一氧化氮信号通路

一氧化氮是一种关键的效应蛋白，除其他作用外，还参与心血管止血和血管舒张。在血管应激的情况下，NO 在其位置合成。它与周围组织上的 sGC 结合，触发 Ca2+ 的下游降低和 cGMP 的增加，进而改变蛋白激酶 G、环核苷酸门控离子通道和磷酸二酯酶的活性，导致附近血管舒张、血流量增加和张力降低。