HTRF AAV5 CAPSID KIT - 500 PTS

产品概述

腺相关病毒（AAV）载体是治疗多种人类疾病的领先基因递送平台，其中 AAV5 血清型具有独特优势 —— 血清阳性率最低，且与预先存在的中和抗体交叉反应极小，这使其在甲型血友病及与其天然组织靶向性相关的疾病（如肺、视网膜或中枢神经系统疾病）的基因治疗中极具应用价值。HTRF AAV5 衣壳检测试剂盒专为 AAV5 病毒颗粒的检测与定量设计，采用免洗涤、操作简便的检测格式，相较于传统 ELISA 方法通量显著提升，为 AAV5 相关基因治疗药物的研发、生物工艺生产质控及过程优化提供高效、精准的解决方案。该试剂盒基于 TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）技术平台，适用于生物工艺场景，可兼容从原始收获物到终产品的各类样品（包括细胞上清液、细胞裂解液），凭借稳定的分析性能与广泛的样品兼容性，助力基因治疗药物研发与生产流程的标准化。

工作原理

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心 TR-FRET 检测技术，核心试剂包含两种特异性抗 AAV5 抗体：一种直接标记 d2（受体荧光团），另一种偶联生物素（Biotin），可与预混液中的链霉亲和素 - 铕穴状化合物（Streptavidin Eu-cryptate，供体荧光团）结合。当样品中存在 AAV5 衣壳时，两种抗体将分别与衣壳上的不同抗原表位结合，形成 “供体 - 生物素抗体 - AAV5 衣壳 - d2 标记抗体” 的夹心复合物，使供体与受体荧光团近距离接触，激发 FRET 信号。信号强度与样品中 AAV5 衣壳的浓度呈正相关，通过校准曲线即可实现 AAV5 病毒颗粒的定量分析，且全程无需洗涤步骤，操作便捷高效。（标注：1assay-principle-aav5-64aav5peg-64aav5peh-64aav5pey.svg 对应 “AAV5 衣壳检测试剂盒 TR-FRET 检测原理示意图”）

检测流程

试剂盒推荐使用 384 孔小体积白色检测板，也可灵活适配至 1536 孔板（按比例调整各试剂体积），具体流程如下：

1. 向检测板中加入 5 µL 样品或标准品，再加入 5 µL 稀释液；
2. 加入 10 µL 预混检测试剂（含生物素抗 AAV5 抗体与链霉亲和素标记供体、d2 标记抗 AAV5 抗体），最终反应体积为 20 µL；
3. 室温下孵育过夜；
4. 使用 HTRF 兼容检测仪读取信号，完成定量分析。

（标注：2assay-protocol-aav5-64aav5peg-64aav5peh-64aav5pey.svg 对应 “AAV5 衣壳检测试剂盒检测流程示意图”）

检测详情

核心检测参数

• 样品体积：5 µL
• 最终反应体积：20 µL
• 检测周期：室温孵育过夜
• 检测下限（LOD，稀释液中）：4.48×10⁸ VP/mL（病毒颗粒 / 毫升）
• 动态范围：1.49×10⁹ – 2.50×10¹¹ VP/mL
• 样品兼容性：兼容从原始收获物到终产品的各类样品，包括细胞上清液、细胞裂解液（适配裂解缓冲液 LB#3）

（标注：3assay-validation-aav5-64aav5peg-64aav5peh-64aav5pey-full-empty-recognition.svg 对应 “AAV5 衣壳检测试剂盒核心检测参数表”）

分析性能

精密度（Precision）

1. 批内精密度

对 3 个不同浓度的样品各重复检测 24 次，浓度为 2.00×10¹¹ VP/mL 的样品 CV 为 6%，5.00×10¹⁰ VP/mL 的样品 CV 为 2%，1.25×10¹⁰ VP/mL 的样品 CV 为 3%，平均 CV 为 4%，批内稳定性良好，可保障平行检测结果的一致性。

2. 批间精密度

3 个样品由不同操作者在 3 次独立实验中完成检测，浓度为 2.00×10¹¹ VP/mL 的样品 CV 为 7%，3.20×10¹⁰ VP/mL 的样品 CV 为 8%，1.28×10¹⁰ VP/mL 的样品 CV 为 11%，平均 CV 为 9%，在多批次、多操作者场景下仍能保持可靠的检测性能，满足常规研发与生产质控需求。

稀释线性（Dilutional Linearity）

对高浓度样品进行梯度稀释验证，原液回收率为 100%，2 倍稀释后回收率为 105%，4 倍稀释后回收率为 99%，8 倍稀释后回收率为 96%，16 倍稀释后回收率为 91%，平均回收率达 98%，线性表现优异，可精准适配不同浓度梯度样品的定量检测，尤其适合高浓度样品的稀释分析。

干扰因素（Interferences）

1. SF9 细胞裂解液蛋白干扰

SF9 细胞裂解液中的总蛋白浓度对检测结果存在一定影响：当总蛋白浓度为 0.5 mg/mL 时，回收率为 126%；0.25 mg/mL 时回收率为 120%；0.125 mg/mL 时回收率为 122%；0.05 mg/mL 时回收率为 115%，整体回收率略高于理想范围，但波动平稳，对检测准确性影响可控。

2. HEK293 细胞裂解液蛋白干扰

HEK293 细胞裂解液的蛋白浓度同样影响检测回收率：总蛋白浓度为 0.5 mg/mL 时，回收率为 128%；0.25 mg/mL 时回收率为 115%；0.125 mg/mL 时回收率为 109%；0.05 mg/mL 时回收率为 115%，回收率整体稳定，即使在较高蛋白浓度下仍能保持较好的检测一致性。

加标回收率（Antigen Spike and Recovery）

1. SF9 细胞裂解液（0.05 mg/mL 总蛋白）

在总蛋白浓度为 0.05 mg/mL 的 SF9 细胞裂解液中加入不同浓度的 AAV5 标准品，2.05×10¹¹ VP/mL 浓度的回收率为 110%，5.12×10¹⁰ VP/mL 浓度的回收率为 117%，1.28×10¹⁰ VP/mL 浓度的回收率为 112%，平均回收率达 113%，检测准确性良好，可满足样品定量的可靠性要求。

2. HEK293 细胞裂解液（0.25 mg/mL 总蛋白）

在总蛋白浓度为 0.25 mg/mL 的 HEK293 细胞裂解液中加标检测，2.05×10¹¹ VP/mL 浓度的回收率为 107%，5.12×10¹⁰ VP/mL 浓度的回收率为 115%，1.28×10¹⁰ VP/mL 浓度的回收率为 104%，平均回收率为 109%，回收率稳定且接近理想范围，检测结果可信。

交叉反应性（Cross Reactivities）

对 AAV 家族其他血清型的交叉反应性进行严格评估，结果显示：试剂盒对 AAV5 的交叉反应性为 100%，而对 AAV1、AAV2、AAV3B、AAV6、AAV8、AAV9 均无交叉反应，特异性极强，可完全避免其他血清型的干扰，确保 AAV5 产品定量的专属准确性。

检测验证

完整与空 AAV5 颗粒的检测验证

为验证试剂盒对完整与空 AAV5 衣壳的检测能力，对 AAV5-CMV-eGFP 完整颗粒（含基因组）和空衣壳（不含基因组）进行检测。先通过独立定量实验将不同浓度的 AAV5-CMV-eGFP（GC/mL）转换为 VP/mL，再将完整颗粒与空衣壳用试剂盒稀释液稀释后，按标准流程（5 µL 样品 + 5 µL 稀释液 + 10 µL 检测试剂，室温孵育过夜）检测。结果显示，试剂盒对完整 AAV5 颗粒和空 AAV5 衣壳的检测效果一致，可全面覆盖两种类型颗粒的定量需求，适配产品完整性评估场景。（标注：4assay-validation-aav5-64aav5peg-64aav5peh-64aav5pey-full-empty-recognition.svg 对应 “AAV5 完整与空衣壳检测验证图”）

产品规格

• 应用领域：生物工艺（Bioprocessing，用于 AAV5 病毒颗粒的检测与定量）
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
• 裂解缓冲液兼容性：适配裂解缓冲液 1、裂解缓冲液 2、裂解缓冲液 3、裂解缓冲液 4
• 产品类别：试剂盒（Kit）
• 样品体积：5 µL
• 运输条件：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别：病毒颗粒（Viral Particles）
• 技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
• 单位规格：500 次检测（500 assay points）