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HTRF BDNF KIT - 10K PTS

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品牌： Revvity

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概述

脑源性神经营养因子（BDNF）是神经营养因子家族的一员，该家族还包括神经生长因子（NGF）以及神经营养因子 3 和 4（NT-3、NT-4）。

在健康或病变大脑相关研究中，BDNF 是研究最为广泛的神经营养因子之一。它由神经元和神经胶质细胞分泌，且受到多种内源性和外源性刺激（如压力、体力活动、脑损伤、饮食）的严格调控。BDNF 在调控神经元与神经胶质细胞发育、发挥神经保护作用以及调节突触相互作用方面扮演关键角色，而这些功能对认知和记忆至关重要。

BDNF 水平降低与多种神经退行性疾病相关，如帕金森病、阿尔茨海默病、多发性硬化症和亨廷顿舞蹈症。

作用机制

BDNF 检测原理

BDNF 的检测采用夹心免疫分析法，该方法涉及两种特异性抗 BDNF 抗体，分别标记有均相时间分辨荧光（HTRF）供体染料和受体染料。信号强度与样本中 BDNF 的浓度呈直接正相关。

（标注：biomarkers-how-it-works-assay-principle-bdnf-62bdnfpeg-62bdnfpeh）

BDNF 检测方案

检测方案使用 384 孔小体积白色微孔板或 Revvity 低体积 96 孔微孔板（最终体积 20 微升），具体步骤如下文所述。将 16 微升细胞上清液或标准品直接加入检测板中，随后使用 HTRF 试剂进行检测。标记有 HTRF 供体和受体的抗体可预先混合，并通过单次加样步骤加入，以进一步简化检测流程。通过按比例调整各试剂的添加体积，该检测可在 96 孔至 384 孔微孔板中进行。

（标注：biomarkers-how-it-works-assay-protocol-bdnf-62bdnfpeg-62bdnfpeh）

检测详情

BDNF 试剂盒技术规格

规格参数	具体说明
样本量	16 微升
最终检测体积	20 微升
结果获取时间	室温下过夜
试剂盒组成	冻干标准品、冷冻检测抗体、缓冲液及说明书
检测限（LOD）与定量限（LOQ）（在稀释液中）	5 皮克 / 毫升及 31 皮克 / 毫升
检测范围	31–5000 皮克 / 毫升
校准方式	国家生物标准与控制研究所（NIBSC）标准值（国际单位 / 毫升）= 0.0012×HTRF BDNF 检测值（皮克 / 毫升）
适用物种	人、小鼠、大鼠、牛、猪、犬
特异性	不识别 NGF、NT-3 及 NT-4

分析性能

BDNF 标准曲线

按照试剂盒说明书中的操作步骤，将试剂盒中提供的重组 BDNF（标准品）用 5 号稀释液进行系列稀释。以所检测的 BDNF 浓度为横坐标，以均相时间分辨荧光（HTRF）信号（以差值比表示）为纵坐标绘制标准曲线。

（标注：analytical-performance-bdnf-1）

精密度

批内精密度（n=24）

样本	BDNF 浓度（皮克 / 毫升）	变异系数（CV）
1	90	4%
2	2500	9%
3	4500	4%
	平均变异系数	5.7%

注：每个样本检测 24 次，并计算每个样本的变异系数（% CV）。

批间精密度（n=5）

样本	BDNF 浓度（皮克 / 毫升）	变异系数（CV）
1	78	9%
2	312	7%
3	1250	4%
	平均变异系数	6.7%

注：每个样本在 5 个不同实验中分别检测，并计算每个样本的变异系数（% CV）。

加标回收率

细胞上清液中 BDNF 浓度（皮克 / 毫升）	加入的重组 BDNF 浓度（皮克 / 毫升）	预期总 BDNF 浓度（皮克 / 毫升）	实测总 BDNF 浓度（皮克 / 毫升）	回收率
21	124	145	147	101.4%
453	334	787	812	103.2%
1335	408	1743	1730	99.3%

检测验证

经 γ- 干扰素（IFN-γ）处理的人小胶质细胞系 HMC3

将人小胶质细胞系 HMC3 接种于含完全培养基的 T75 培养瓶中（3×10^6 个细胞），培养至细胞融合度达到 80%。随后，用 10 纳克 / 毫升的人 γ- 干扰素（IFN-γ）处理细胞 24 小时（对照组不处理）。收集细胞上清液，按照 HTRF 试剂盒说明书中的步骤检测 BDNF 的分泌水平。

结果显示，与文献报道一致，经 γ- 干扰素（IFN-γ）处理的小胶质细胞 BDNF 释放量降低。

（标注：Assay-validation-bdnf-1）

经促炎细胞因子处理的人诱导多能干细胞（hiPSC）来源星形胶质细胞 Astro.4U

将人诱导多能干细胞（hiPSC）来源的星形胶质细胞（Astro.4U®，购自 Ncardia 公司）接种于包被有多聚 - L - 鸟氨酸 / 层粘连蛋白的 96 孔板中，培养 7 天。随后，用混合促炎细胞因子（10 纳克 / 毫升肿瘤坏死因子 -α + 100 纳克 / 毫升白细胞介素 - 1β + 100 纳克 / 毫升 γ- 干扰素）处理细胞 24 小时（对照组不处理）。收集细胞上清液，按照 HTRF 试剂盒说明书中的步骤检测 BDNF 的分泌水平。

结果符合预期，星形胶质细胞在暴露于混合促炎细胞因子后，BDNF 的分泌浓度显著升高。

（标注：assay-validation-bdnf-2）

简化通路

BDNF 相关简化通路

星形胶质细胞对其所处环境高度敏感，能对中枢神经系统（CNS）损伤快速作出反应。激活的信号通路可使星形胶质细胞呈现促炎或抗炎表型。

在某些细胞因子和生长因子的作用下，星形胶质细胞会激活 Jak/STAT3 信号通路。该通路被认为可上调并促进多种神经营养因子和神经保护因子的分泌，这些因子（包括 BDNF）能够促进神经元存活和突触修复。

（标注：biomarkers-tab4-bdnf-simplified-pathway-62bdnfpeg-62bdnfpeh）

产品规格

其他规格参数

规格类别	具体说明
应用领域	蛋白质定量
品牌	HTRF
检测方式	均相时间分辨荧光（HTRF）
产品类型	试剂盒
样本体积	16 微升
运输条件	干冰运输
目标类别	生物标志物
技术原理	时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域	神经科学
产品规格	10,000 次检测用量

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货号：62BDNFPEH

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