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HTRF GLUCAGON KIT - 10K PTS

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品牌： Revvity

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概述

胰高血糖素检测试剂盒灵敏度高、操作简便，可对细胞培养基中的胰高血糖素进行可靠定量。该检测基于完全均相的实验方案，无需任何洗涤或复杂提取步骤，相较于酶联免疫吸附试验（ELISA）能显著节省时间。操作流程简单：只需加入检测试剂、孵育后即可读数！

作用机制

检测原理

胰高血糖素的检测采用双抗夹心免疫分析法，使用两种单克隆抗体：一种用 Lumi4 铽（Tb）穴状化合物（供体）标记，另一种用 d2（受体）标记。所获得的荧光共振能量转移（FRET）信号强度与样本中胰高血糖素的浓度呈正相关。

（标注：biomarkers-how-it-works-assay-principle-glucagon-62cglpeg，为图表 / 文件标识，保留原文）

检测方案

向 10 微升（µL）细胞上清液中加入 5 微升受体标记抗体和 5 微升供体标记抗体（或加入 10 微升预混合试剂，实现单次加样）。将混合液在室温（RT）下孵育 4 小时至过夜，随后在兼容均相时间分辨荧光（HTRF）技术的读数仪上读取结果。

（标注：biomarkers-how-it-works-assay-protocol-glucagon-62cglpeg-62cglpeh，为图表 / 文件标识，保留原文）

检测详情

特异性

肽类物质	特异性（识别率）
胰高血糖素（Glucagon）	100%
促胃酸素调节素（Oxyntomodulin）	<0.07%
胰高血糖素原（Glicentin）	<0.07%
胰高血糖素片段 1-18（Glucagon fragment 1-18）	<1.81%
胰高血糖素片段 19-29（Glucagon fragment 19-29）	<0.03%
胰高血糖素样肽 - 1（7-36）酰胺（GLP-1 (7-36) amide）	<0.06%
胰高血糖素样肽 - 1（7-37）（GLP-1 (7-37)）	<0.11%
胰高血糖素样肽 - 2（GLP-2）	<0.3%
胰高血糖素原相关胰多肽（GRPP, Glicentin-Related Pancreatic Peptide）	<0.01%

灵敏度

以下为在细胞培养基条件下稀释胰高血糖素标准品所获得的典型校准曲线（最终体积 20 微升，使用白色 384 孔小体积板）。样本在室温下孵育过夜，并使用 5 号稀释液稀释。该检测的线性范围为 15.6–2000 皮克 / 毫升（pg/mL），测得的检测限为 6 皮克 / 毫升（使用 PHERAstar FS 读数仪，闪光灯激发）。

（标注：specifications-glucagon-1，为图表 / 文件标识，保留原文）

线性

对细胞培养基中的稀释线性进行了评估，回收率在 88%–100% 之间，证实了该检测的线性性能。实验操作如下：将小鼠 α-TC1-6 细胞接种到 96 孔细胞培养板中（10 万个细胞 / 孔），使用含 25mM 葡萄糖的完全培养基，在 37°C、5% 二氧化碳（CO₂）条件下孵育 24 小时。移除培养基，用 KRB 缓冲液（克 - 林二氏缓冲液）洗涤孔板两次，随后用含低浓度葡萄糖（1mM）的 KRB 缓冲液孵育 1 小时。收集上清液，用 5 号稀释液进行系列稀释。结果以 “实测值占预期值的百分比” 表示。

（标注：specifications-glucagon-2，为图表 / 文件标识，保留原文）

小鼠 α 细胞上清液用 5 号稀释液的系列稀释结果：

稀释度	小鼠 α 细胞上清液胰高血糖素实测浓度（pg/mL）	胰高血糖素预期浓度（pg/mL）	预期浓度占比
未稀释	1460.0	-	-
1:2（1 倍稀释）	733.0	730.0	100.4%
1:4（1 倍稀释）	351.0	365.0	96.2%
1:8（1 倍稀释）	167.0	182.5	91.5%
1:16（1 倍稀释）	80.3	91.3	88.0%

批内与批间变异

对细胞培养基条件下的批内和批间变异进行了评估，典型变异系数（CV）均低于 5%，证明该检测具有稳健性和可重复性。

批内变异（n=24）

标准品	浓度（pg/mL）	变异系数（CV）
标准品 2	31.25	2.8%
标准品 6	500	2.4%
标准品 8	2000	3.0%

批间变异（n=6）

标准品	浓度（pg/mL）	变异系数（CV）
标准品 2	31.25	8.1%
标准品 6	500	4.4%
标准品 8	2000	5.4%

检测验证

小鼠分离胰岛的验证实验

将从 C57BL/6J 小鼠中分离出的 15 个胰岛暴露于浓度递增的葡萄糖或肾上腺素中。暴露处理后，收集上清液并定量其中的胰高血糖素水平。在葡萄糖存在的条件下，即使每孔仅使用 15 个胰岛，也能稳定检测到胰高血糖素水平。所有结果与其他研究人员此前发表的数据一致。

（致谢：法国蒙彼利埃功能基因组学研究所，胰岛 β 细胞病理生理学研究团队）

（标注：assay-validation-glucagon-1，为图表 / 文件标识，保留原文）

规格参数

其他规格

类别	详情
应用领域（Application）	蛋白质定量（Protein Quantification）
品牌（Brand）	HTRF（均相时间分辨荧光技术，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence 的缩写）
检测方式（Detection Modality）	HTRF
产品类别（Product Group）	试剂盒（Kit）
样本体积（Sample Volume）	10 微升（10 µL）
运输条件（Shipping Conditions）	干冰运输（Shipped in Dry Ice）
靶标类别（Target Class）	生物标志物（Biomarkers）
技术（Technology）	时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET，Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer）
治疗领域（Therapeutic Area）	代谢 / 糖尿病（Metabolism/Diabetes）
单位规格（Unit Size）	10000 个检测点（10,000 assay points）

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货号：62CGLPEH

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