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HTRF ACTIVE GLP1 KIT - 10K PTS GLP1检测试剂盒-10,000测试

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品牌： Revvity

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概述


活性胰高血糖素样肽 - 1（Active GLP-1），又称活性形式的胰高血糖素样肽 - 1（包括 GLP-1 (7-36) NH₂和 GLP-1 (7-37)），已成为 2 型糖尿病治疗中的关键生物标志物。GLP-1 的主要作用是刺激胰岛素分泌、抑制胰高血糖素分泌及减少食物摄入。在体内，这些活性形式会被二肽基肽酶 IV（DPP-IV）迅速降解为非活性形式（9-36）NH₂和（9-37）。活性 GLP-1 检测试剂盒旨在快速检测细胞上清液中的 GLP-1。


作用机制
检测原理
活性 GLP-1 的检测采用双抗体夹心免疫分析法，涉及两种抗体：一种用 Lumi4Tb - 穴状化合物（供体）标记，另一种用 d2（受体）标记。信号强度与样本中活性形式 GLP-1 的浓度成正比。


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检测方案
活性 GLP-1 检测可在细胞上清液上进行，采用右侧所述的简单 “添加并读取” 流程（无需洗涤步骤）。HTRF 偶联物可预先混合，通过单次加样步骤加入，进一步简化流程。通过按比例调整各添加体积，检测可在 96 孔至 384 孔板中进行。本文所述的活性 GLP-1 检测方案使用白色 384 孔小体积板。


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检测详情
核心特性


项目活性 GLP-1 具体参数
孵育条件室温（RT）下过夜（ON）
线性范围43.8–1400 皮克 / 毫升（pg/mL）
检测限25 皮克 / 毫升（pg/mL）*
物种反应性大鼠、小鼠、人、猪
肽段交叉反应性
GLP-1 (7-36) 酰胺100%
GLP-1 (7-37)98.04%
GLP-1 (1-36) 酰胺0.39%
GLP-1 (1-37)0.37%
GLP-1 (9-36) 酰胺<0.01%
GLP-1 (7-17)<0.01%
GLP-2<0.01%
胰高血糖素<0.01%


标准曲线
活性 GLP-1 标准曲线在 20 微升的最终检测体积中绘制，并在 Pherastar 仪器（BMG LABTECH）上读取。


* 注意：所有兼容 HTRF 的读数仪均可达到此灵敏度标准，但 SpectraMax M5e 和 FlexStation 除外。


specifications-active


分析性能
HTRF 与 ELISA 检测格式的比较
如下所示，活性 GLP-1 检测与传统 ELISA 检测具有良好的相关性，同时操作更简便、节省时间。在白色 384 孔小体积板中，使用未经处理的 NCI-H176 细胞上清液对 HTRF 和 ELISA 检测 GLP-1 的效果进行了平行比较，相关系数为 0.97（n=6）。


HTRF 活性 GLP-1 检测荧光 ELISA 检测
1 步混合并读取（无需洗涤）—— 检测时间 < 1 小时6 个连续步骤 —— 检测时间 > 4 小时


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检测验证
稀释线性评估
使用 HTRF 检测稀释液对 NCI-H716 细胞上清液 1 和 2 进行稀释，然后测定未经处理的上清液及稀释样本（1:2、1:4、1:8、1:16）中的 GLP-1 浓度。右侧图表显示 3 次独立实验的平均值（± 标准差）。实测 GLP-1 浓度与预期浓度之间的强相关性表明，在检测范围内稀释具有线性。


assay-validation-active-glp


NCI-H716 细胞中活性 GLP-1 分泌的葡萄糖剂量反应
测定人肠内分泌 NCI-H716 细胞在葡萄糖刺激后活性 GLP-1 分泌的时间曲线。将细胞（2×10⁵个细胞 / 孔）接种到预先用基质胶包被的 96 孔培养板中，用含 10% 胎牛血清（FBS）的 DMEM 培养基培养两天。实验当天，洗涤细胞后，在 100 微升含 DPP IV 抑制剂的 KRB 缓冲液中加入不同浓度的葡萄糖，孵育 2 小时。葡萄糖刺激结束后，将 10 微升上清液转移至 384 孔小体积板中，按照 “检测方案” 所述测定活性 GLP-1 水平。如预期所示，活性 GLP-1 的诱导具有葡萄糖剂量依赖性。10% 葡萄糖诱导的活性 GLP-1 最大幅度是基础分泌量的 2.1 倍。


assay-validation-active-glp


规格参数


其他规格


项目内容
应用领域蛋白质定量
品牌HTRF
检测方式HTRF
产品类别试剂盒
样本体积10 微升（10 µL）
运输条件干冰运输
靶标类别生物标志物
技术TR-FRET
治疗领域代谢 / 糖尿病
单位规格10,000 个检测点


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货号：62GLPPEH
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