概述

CCL22（C-C 基序趋化因子 22），先前被称为巨噬细胞衍生趋化因子（MDC），是一种由树突状细胞（DC）、巨噬细胞和活化的 B 淋巴细胞分泌的趋化因子。CCL22 可与多种细胞类型中存在的 CCR4 结合。

CCL22 由 M2 型巨噬细胞分泌，这类巨噬细胞有助于辅助性 T 细胞 2（Th2）相关反应，如吞噬作用、组织修复和伤口愈合。

研究表明，CCL22 通过与 CCR4 结合，还参与特应性疾病的发病过程，如哮喘和特应性皮炎（AD）。

血清样本的检测通常需要更高的灵敏度。在某些情况下，AlphaLISA 检测法可能具备足够的灵敏度，能够检测出血清或血浆中低水平的分析物。检测时，务必遵循推荐的实验方案，并避免使用严重溶血的样本。

作用机制

检测原理

将细胞上清液、样本或标准品直接加入检测板中，使用 HTRF® 试剂进行检测（采用 20μl 体系，384 孔低体积白板或 Revvity 96 孔低体积板）。预先混合标记有 HTRF 供体和受体的抗体，通过单次加样步骤加入，以进一步简化检测流程。通过按比例调整各添加体积，该检测可扩展至 1536 孔板格式。

检测数据分析

通常建议采用四参数 Logistic（4PL）曲线拟合酶联免疫吸附试验（ELISA）标准曲线。与线性分析相比，这种回归方法能够在更宽的浓度范围内准确测量未知样本，因此非常适合分析细胞因子释放等生物系统。如需全面了解如何处理 HTRF 数据以及 4PL 1/y² 拟合方法，请访问此页面。Cisbio 还与Myassays.com合作，为您的数据分析提供支持。点击此链接，您将能够使用免费的在线软件进行 CCL22 分析。

检测详情

人 CCL22 试剂盒技术规格

项目	详情
样本量	16μL
最终检测体积	20μL
试剂盒组成	冻干标准品、冷冻检测抗体、缓冲液及实验方案
检测限与定量限（在稀释液中）	5.7pg/mL 和 7.9pg/mL
检测限与定量限（在 RPMI 培养基中）	9.8pg/mL 和 16.8pg/mL
检测限与定量限（在 DMEM 培养基中）	7.7pg/mL 和 13.8pg/mL
检测范围	35–4000pg/mL
出结果时间	室温下 4 小时至过夜
适用物种	仅人

分析性能

批内与批间检测

批内检测（n=24）

样本	CCL22 平均浓度（pg/mL）	变异系数（CV）
1	584	9%
2	284	4%
3	139	7%
	平均变异系数	6%

每个样本检测 24 次，并计算每个样本的变异系数（% CV）。

批间检测（n=4）

样本	CCL22 平均浓度（pg/mL）	变异系数（CV）
1	560	7%
2	396	9%
	平均变异系数	9%

每个样本在 4 个不同实验中进行检测，并计算每个样本的变异系数（% CV）。

稀释线性

样本	稀释倍数	预期 CCL22 浓度（pg/mL）	实测 CCL22 浓度（pg/mL）	回收率
1	1	-	584	-
	2	292	284	97%
	4	142	139	98%
	平均值	-	-	97%
2	1	-	1168	-
	2	584	584	100%
	4	292	262	90%
	平均值	-	-	95%

这些实验中获得的优异回收率表明该检测具有良好的线性。

加标回收率

向 2 种不同的经刺激的外周血单个核细胞（PBMC）上清液样本（S1 和 S2）中加入不同量的重组细胞因子（P1、P2 或 P3）。

将标准曲线得到的一组响应值与计算出的预期值进行比较。观察到的约 100% 的回收率验证了本检测所用样本基质的适用性。

RPMI 培养基	重组蛋白浓度（pg/ml）	预期浓度（pg/ml）	实测浓度（pg/ml）	回收率
S1 天然样本	0	-	596	-
S1-P1 加标	845	1440	1520	95%
S1-P2 加标	401	997	1040	96%
S1-P3 加标	167	763	817	93%
平均值	-	-	-	95%
S2 天然样本	0	-	350	-
S2-P1 加标	845	1194	1096	109%
S2-P2 加标	401	751	734	102%
平均值	-	-	-	105%

检测验证

经 PHA-P 和 PHA-M 刺激的 PBMC 细胞中 CCL22 的分泌

将外周血单个核细胞以 200k 和 300k 细胞 / 孔的密度接种，分别用 10μg/mL 的 PHA-P 和 PHA-M 刺激 72 小时。

随后将 16μL 上清液转移至白色检测板（384 孔低体积）中，并加入 4μL HTRF 人 CCL22 检测试剂。室温下孵育过夜后记录 HTRF 信号。

在 RPMI 培养基中制备的标准曲线可用于估算每个样本中的 CCL22 浓度。结果显示，PHA-M 刺激诱导的 CCL22 分泌量多于 PHA-P。在未受刺激的样本中仅检测到少量 CCL22。

assay-validation_human（标注：图表 / 文件标识，保留原文）

与其他技术的校准

将不同密度的外周血单个核细胞用 10μg/mL 的 PHA-P 刺激 48 或 72 小时。分别使用 HTRF 人 CCL22 检测试剂盒、AlphaLISA 人 CCL22 检测法和 ELISA 检测法估算不同样本（纯样本和稀释样本）中的 CCL22 浓度。

对于 HTRF 检测，将 16μL 不同的细胞上清液转移至白色检测板（384 孔低体积）中，并加入 4μL HTRF 人 CCL22 检测试剂。室温下孵育过夜后记录 HTRF 信号。

对于 AlphaLISA 检测，将 5μL 细胞上清液转移至灰色检测板（384 孔板）中，并加入 45μL 检测试剂。室温下孵育 3 小时后记录 AlphaLISA 计数。

AlphaLISA 人 CCL22 检测法和 HTRF 人 CCL22 检测试剂盒对每个样本的浓度估算结果一致，而 ELISA 检测法估算的浓度值仅为 HTRF 和 AlphaLISA 检测法的一半。

规格参数

其他规格

类别	详情
应用领域（Application）	蛋白质定量（Protein Quantification）
品牌（Brand）	HTRF
检测方式（Detection Modality）	HTRF
产品类别（Product Group）	试剂盒（Kit）
样本体积（Sample Volume）	16μL
运输条件（Shipping Conditions）	干冰运输（Shipped in Dry Ice）
靶标类别（Target Class）	细胞因子（Cytokines）
靶标物种（Target Species）	人（Human）
技术（Technology）	TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移技术）
单位规格（Unit Size）	10,000 个检测点（10,000 assay points）

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HTRF HUMAN CCL22 KIT - 10K PTS

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