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HTRF INSULIN HIGH RANGE KIT - 10K PTS 胰岛素宽线性范围检测试剂盒 - 10000测试

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品牌： Revvity

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概述

在检测中对胰岛素进行定量分析前，高浓度样本通常需先稀释。这款 HTRF（均相时间分辨荧光共振能量转移技术，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence）高量程试剂盒无需清洗步骤，且具备 4 个数量级的动态检测范围，可实现样本低稀释度检测并提升准确性，为胰岛素的简便、可靠定量提供保障。

工作原理

检测原理

胰岛素检测采用双抗体夹心免疫分析法，所用两种单克隆抗体中，一种标记有穴状化合物（供体），另一种标记有 XL665（受体）。检测得到的荧光共振能量转移（FRET，Fluorescence Resonance Energy Transfer）信号强度与样本中胰岛素浓度呈正相关。

（配图说明：1biomarkers-how-it-works-assay-principle-insulin-high-range-62in1peg-62in1peh.svg）

检测流程

取 5 微升（µL）细胞上清液，加入 50 微升受体标记抗体和 25 微升供体标记抗体（或加入 75 微升预混试剂，实现一步加样）。将混合液在室温（RT，Room Temperature）下孵育 4 小时至过夜，随后在兼容 HTRF 技术的检测仪上读取检测结果。

（配图说明：2biomarkers-how-it-works-assay-protocol-insulin-high-range-62in1peg-62in1peh.svg）

检测详情

与主流放射免疫分析法（RIA）的相关性

在人胰岛上清液样本中，HTRF 高量程胰岛素检测法与主流放射免疫分析法（RIA，Radioimmunoassay）表现出极佳的相关性。该检测法的回归曲线斜率为 0.9，接近理想曲线，证明其检测结果具有高可靠性。

（配图说明：3-1-specifications-insulin-high-range-1.svg）

检测验证

在小鼠和大鼠 β 细胞上的验证

将 MIN6 小鼠 β 细胞和 INS-1E 大鼠 β 细胞接种于 24 孔板（每孔 40 万个细胞，含 500 微升培养基），随后在 37℃、5% 二氧化碳（CO₂）环境下，用完全培养基培养 6 天。刺激前，先用 KRB 缓冲液（Krebs-Ringer Bicarbonate Buffer，克雷布斯 - 林格碳酸氢盐缓冲液）清洗细胞，再将细胞置于无葡萄糖的 KRB 缓冲液中，在 37℃下进行 2 小时的细胞静息处理。之后用 250 微升含不同浓度葡萄糖的 KRB 缓冲液刺激细胞：MIN6 细胞分别刺激 10 分钟和 30 分钟以收集分泌产物，INS-1E 细胞则刺激 2 小时，收集细胞上清液 * 后，使用 HTRF 检测试剂对胰岛素进行定量分析。每种处理条件均设 3 次重复检测（误差线代表均值标准误，SEM，Standard Error of Mean）。

* 样本由法国蒙彼利埃 IGF 研究所（IGF Institute）“胰岛 β 细胞病理生理学” 研究团队的 S. Dalle（S・达勒）与 M. Ravier（M・拉维耶）提供。

（配图说明：4-1assay-validation-insulin-high-range-1.svg、5-1assay-validation-insulin-high-range-2.svg）

在大鼠胰岛上的验证

取雄性 Wistar 大鼠（维斯特大鼠）新鲜分离的胰岛，分别置于含 2.8 毫摩尔 / 升（mM）葡萄糖（非刺激性基础条件）或 8.3 毫摩尔 / 升葡萄糖（刺激性条件）的 KRB 缓冲液中，在 37℃下孵育 30 分钟（每管 5 个胰岛，每个条件设 4 管）。孵育结束后，收集上清液 *，使用高量程胰岛素试剂盒试剂测定胰岛素浓度。

* 样本由法国蒙彼利埃大学药学院（Faculté de Pharmacie, Université de Montpellier）、法国国家科学研究中心（CNRS，Centre National de la Recherche Scientifique）UMR-5247 马克斯・穆瑟隆生物分子研究所（IBMM，Institut des Biomolécules Max Mousseron）“糖尿病药理学实验室”（Laboratoire de Pharmacologie du Diabète）慷慨提供。

（配图说明：6-1assay-validation-insulin-high-range-3.svg）

在离体灌注大鼠胰腺上的验证

取雄性 Wistar 大鼠的离体胰腺，用含 1.5 克 / 升（g/L）葡萄糖（添加或不添加 10 微摩尔 / 升（µM）槲皮素）的 KRB 缓冲液进行灌注。灌注过程中，培养基持续通入 95% 氧气（O₂）和 5% 二氧化碳的混合气体，并维持在 37.5℃。通过设定恒定压力，使灌注流速保持在 2.5-3.3 毫升 / 分钟（mL/min）。随时间收集流出液 *（共 13 个组分），使用试剂盒试剂测定胰岛素浓度。

* 样本由法国蒙彼利埃大学药学院、法国国家科学研究中心 UMR-5247 马克斯・穆瑟隆生物分子研究所 “糖尿病药理学实验室” 慷慨提供。

（配图说明：7-1assay-validation-insulin-high-range-4.svg）

在人胰岛上的验证

取 3 个人胰腺（编号 A、B、C）的胰岛，接种于 24 孔板（每孔 50 个胰岛，每个条件设 3 孔），在含 2.8 毫摩尔 / 升葡萄糖的 KRBH 缓冲液（Krebs-Ringer Bicarbonate HEPES Buffer，含 HEPES 的克雷布斯 - 林格碳酸氢盐缓冲液）中，于 37℃下预孵育 1 小时。继续孵育 1 小时后，收集上清液以测定基础胰岛素分泌量；随后用含 16.7 毫摩尔 / 升葡萄糖的缓冲液在 37℃下刺激胰岛 1 小时，收集上清液以测定葡萄糖刺激后的胰岛素分泌量。之后用酸性乙醇溶液裂解胰岛 24 小时，收集裂解液并离心，最后使用高量程胰岛素试剂盒试剂对上清液和裂解液中的胰岛素进行定量分析。

* 样本由法国蒙彼利埃大学医院（Montpellier University Hospital）再生医学与生物治疗研究所（IRMB，Institute for Regenerative Medicine and Biotherapy）“糖尿病细胞治疗实验室”（Laboratory of Cell Therapy for Diabetes）制备。

（配图说明：8-1assay-validation-insulin-high-range-5.svg）

规格参数

其他规格：无详细信息（原文未提供）
应用领域：蛋白质定量（Protein Quantification）
品牌：HTRF
检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光共振能量转移技术）
产品类别：试剂盒（Kit）
样本体积：5 微升（µL）
运输条件：常温运输（Shipped Ambient）
目标类别：生物标志物（Biomarkers）
技术类型：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移技术，Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer）
治疗领域：代谢 / 糖尿病（Metabolism/Diabetes）
单位规格：10,000 次检测用量（10,000 assay points）

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货号：62IN1PEH

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参考价格 ¥ 121503.96

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1盒/10000测试￥121503.96

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