登录 注册 购物车 13310039714

当前位置:首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Biomarkers > HTRF INSULIN MOUSE SERUM KIT - 200 PTS 小鼠胰岛素检测试剂盒-20°C0测试

概述


多年来,研究人员一直寻找兼具绝对特异性、灵敏度、准确性、低样本消耗和易用性的理想胰岛素检测方法,如今这一需求已得到满足。本血清胰岛素检测试剂盒特异性与灵敏度优异,可可靠定量血清和血浆样本中的胰岛素;基于均相实验方案,无需洗涤或复杂提取步骤,相比 ELISA(酶联免疫吸附试验)能显著节省时间。


工作原理

检测原理

采用双抗体夹心免疫分析法检测胰岛素,两种单克隆抗体分别标记穴状化合物(供体)和 XL665(受体)。检测获得的荧光共振能量转移(FRET)信号强度,与样本中胰岛素浓度呈正相关。
(配图说明:1biomarkers-how-it-works-assay-principle-insulin-high-range-62in1peg-62in1peh.svg)

检测流程

取 10 微升(µL)细胞上清液,加入 10 微升受体标记抗体和 5 微升供体标记抗体(或直接加 15 微升预混试剂实现一步加样)。将混合液在室温(RT)下孵育 4 小时至过夜,随后用兼容 HTRF(均相时间分辨荧光共振能量转移)技术的检测仪读取结果。
(配图说明:2biomarkers-how-it-works-assay-protocol-insulin-high-range-62in1peg-62in1peh.svg)


检测详情

灵敏度

检测限定义为高于 0 号校准品两个标准差的数值,本试剂盒以 NIBSC(英国国家生物制品检定所)国际标准品 66/304 校准,1 纳克(ng)HTRF® 胰岛素等效于 1 纳克 NIBSC 66/304 胰岛素(即 2.3×10⁻⁵国际单位 IU)。样本室温孵育过夜后,检测线性范围为 0.24-8 纳克 / 毫升(ng/mL),实测检测限为 0.064 纳克 / 毫升。
(配图说明:3-3specifications-insulin-mouse-serum-1.svg)

批内精密度

对 5 个小鼠血清样本检测,结果如下:样本 1 胰岛素平均浓度 0.25ng/mL,变异系数(CV)7.6%;样本 2 平均浓度 0.73ng/mL,CV 3.7%;样本 3 平均浓度 0.9ng/mL,CV 5.4%;样本 4 平均浓度 2.84ng/mL,CV 4.6%;样本 5 平均浓度 5.17ng/mL,CV 4.0%;所有样本平均 CV 为 5.1%。

批间精密度

对 5 个小鼠血清样本跨批次检测,结果如下:样本 1 胰岛素平均浓度 0.37ng/mL,CV 14.6%;样本 2 平均浓度 0.67ng/mL,CV 9.5%;样本 3 平均浓度 0.9ng/mL,CV 4.0%;样本 4 平均浓度 1.1ng/mL,CV 8.1%;样本 5 平均浓度 6.9ng/mL,CV 9.2%;所有样本平均 CV 为 9.1%。

稀释线性

对 3 个小鼠血清样本做不同倍数稀释检测:样本 1 稀释 2.5 倍时,预期浓度 0.388ng/mL、实测 0.368ng/mL、回收率 95%,稀释 5 倍时预期 0.194ng/mL、实测 0.188ng/mL、回收率 97%;样本 2 稀释 2.5 倍时预期 1.6ng/mL、实测 1.57ng/mL、回收率 98%,稀释 5 倍时预期 0.8ng/mL、实测 0.9ng/mL、回收率 110%;样本 3 稀释 2.5 倍时预期 2.84ng/mL、实测 3ng/mL、回收率 105%,稀释 5 倍时预期 1.42ng/mL、实测 1.66ng/mL、回收率 117%;所有样本平均回收率 103.7%。

加标回收率

对 3 个小鼠血清样本做加标检测:样本 1 加 2.3ng/mL 胰岛素时,预期浓度 3.05ng/mL、实测 3.6ng/mL、回收率 118%,加 4.8ng/mL 时预期 5.55ng/mL、实测 6.4ng/mL、回收率 115%;样本 2 加 2.4ng/mL 时预期 4.9ng/mL、实测 4.8ng/mL、回收率 98%,加 4.8ng/mL 时预期 7.3ng/mL、实测 8ng/mL、回收率 110%;样本 3 加 0.8ng/mL 时预期 5ng/mL、实测 5.4ng/mL、回收率 108%,加 1.6ng/mL 时预期 5.8ng/mL、实测 6.2ng/mL、回收率 107%;所有样本平均回收率 109.3%。

与主流 ELISA 的相关性

在胰岛素低滴度和高滴度血清样本中,本 HTRF 小鼠血清胰岛素检测法,与主流吸光度 ELISA、化学发光 ELISA 均表现出极佳相关性,回归曲线斜率分别为 1.1 和 0.9,接近理想曲线,证明检测可靠性。
(配图说明:4-3specifications-insulin-mouse-serum-2.svg、5-3specifications-insulin-mouse-serum-3.svg)


检测验证

正常小鼠血清验证

将 C57BL/6J 小鼠随机分两组,每组 7 只,一组禁食过夜、一组正常喂养。处死小鼠后收集血液制备血清,用本试剂盒测定每个样本的胰岛素浓度。
(配图说明:6-3assay-validation-insulin-mouse-serum-1.svg)

糖尿病小鼠血浆验证

取 5 只 db/db 糖尿病雄性小鼠、5 只 db/+ 对照雄性小鼠,均禁食过夜。处死小鼠后通过心脏穿刺收集血液,制备 K3 EDTA 抗凝血浆,用本试剂盒测定每个样本的胰岛素浓度。
(配图说明:7-3assay-validation-insulin-mouse-serum-2.svg)

肥胖小鼠血清验证

取 8 只 ob/ob 肥胖小鼠、8 只 ob/+ 对照小鼠,处死小鼠后通过心脏穿刺收集血液制备血清,用本试剂盒测定每个样本的胰岛素浓度。
(配图说明:8-3assay-validation-insulin-mouse-serum-3.svg)


规格参数


  • 其他规格:无相关详细信息(原文未提供)
  • 应用领域:蛋白质定量
  • 品牌:HTRF(均相时间分辨荧光共振能量转移技术,Homogeneous Time-Resolved Fluorescence 缩写,为该类检测常用技术品牌标识)
  • 检测方式:HTRF(均相时间分辨荧光共振能量转移技术)
  • 产品类别:试剂盒(Kit)
  • 样本体积:5 微升(µL)
  • 运输条件:常温运输
  • 目标类别:生物标志物(Biomarkers)
  • 目标物种:小鼠(Mouse)
  • 技术类型:TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移技术,Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer 缩写)
  • 治疗领域:代谢 / 糖尿病(Metabolism/Diabetes)
  • 单位规格:200 次检测用量(200 assay points)


    没有数据
    没有数据
    没有数据