产品概述

p40 是 p40 家族细胞因子的共有亚基，该家族包括 IL-12（p40+p35 异二聚体）、IL-23（p40+p19 异二聚体）、p40 单体及 p80 同源二聚体（p40+p40）。检测这一共享亚基可覆盖上述 4 种细胞因子，它们在炎症和免疫调节中发挥关键作用。

工作原理

检测原理

将细胞上清液、样本或标准品直接加入检测板（384 孔低体积白色板或 Revvity 低体积 96 孔板，终体积 20 µL），随后使用 HTRF 试剂进行检测。标记 HTRF 供体和受体的抗体已预先混合，单次加样即可完成操作，简化流程。检测可适配至 1536 孔板格式，仅需按比例调整试剂体积。（标注：cytokines-how-it-works-assay-protocol 为图表 / 文件标识，可译为 “IL12/23 p40 检测方案”）

检测特异性与数据分析

• 特异性：仅适用于人源样本，对 p40 具有高特异性，与 IL-12、IL-23、p40 单体及 p80 二聚体等含 p40 的细胞因子交叉反应。
• 数据分析：推荐用 4 参数逻辑（4PL）曲线拟合标准曲线，能更宽范围准确量化样本。Revvity 与Myassays.com合作提供数据分析支持，可通过链接获取免费在线分析软件。

（标注：cytokines-how-it-works-assay-principle 为图表 / 文件标识，可译为 “IL12/23 p40 检测原理”）

检测详情

试剂盒技术规格

• 样本量：16 µL
• 最终检测体积：20 µL
• 试剂盒组分：冻干标准品、冷冻检测抗体、缓冲液及实验方案
• 检测限（LOD）：稀释液中 15 pg/mL；DMEM+10% FCS 中 56 pg/mL；RPMI+10% FCS 中 55 pg/mL
• 定量限（LOQ）：稀释液中 71 pg/mL；DMEM+10% FCS 中 96 pg/mL；RPMI+10% FCS 中 109 pg/mL
• 检测范围：71–10000 pg/mL
• 出结果时间：室温过夜（Overnight at RT）
• 校准公式：NIBSC（95/544）IL-12 值（IU/mL）= 0.01 × HTRF 人源 IL12/23 p40 值（pg/mL）
• 适用物种：仅人（Human only）

分析性能

批内与批间精密度

• 批内精密度（n=24）：3 个样本平均 CV 为 8.4%，样本为刺激后的 THP1 细胞上清液。
• 批间精密度（n=3）：3 个样本平均 CV 为 4.6%，样本为刺激后的 THP1 细胞上清液。

稀释线性

• THP1 细胞上清液用试剂盒稀释液系列稀释，平均回收率 89%，显示良好的稀释线性。

加标回收

• 向 THP1 细胞上清液中添加 3 个浓度梯度的重组 p40，平均回收率 111%，表明样本与试剂盒标准品的细胞因子检测结果一致性良好。

交叉反应

• 人源相关因子：p40 单体（100%）、p80 二聚体（65%）、IL-12（62%）、IL-23（51%）。
• 非人源因子：小鼠、大鼠的 p40 家族因子交叉反应均为 0%，检测具有人源特异性。

检测验证

LPS 刺激 THP1 人源单核细胞分泌 IL12/23 p40

THP1 细胞在含 10% FCS 的 RPMI1640 培养基中培养，以 2×10⁵个 / 孔和 4×10⁵个 / 孔的密度接种到 96 孔板，用梯度浓度 LPS 刺激 24 小时。取 16 µL 上清液转移至 384 孔低体积白色检测板，加入 4 µL HTRF 检测试剂，室温过夜孵育后读取信号。结果显示，LPS 剂量增加可促进 IL12/23 p40 分泌，2×10⁵个 / 孔的细胞密度为该悬浮细胞模型的最佳检测密度。（标注：assay-validation 为图表 / 文件标识，可译为 “IL12/23 p40 检测验证”）

产品规格

其他规格

• 应用领域：Protein Quantification（蛋白定量）
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
• 动态范围（Dynamic Range）：71–10000 pg/mL
• 检测限（Limit of Detection）：15 pg/mL
• 定量限（Limit of Quantification）：71 pg/mL
• 产品类别（Product Group）：Kit（试剂盒）
• 样本体积：16 µL
• 运输条件：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别（Target Class）：Cytokines（细胞因子）
• 靶标物种（Target Species）：Human（人）
• 技术平台（Technology）：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
• 单位规格（Unit Size）：500 次检测（500 assay points）