HTRF TGF BETA 1 KIT - 500 PTS 转化生长因子-β1测量试剂盒-500测试

激活步骤

样品和细胞培养上清液含有 TGF β 1 和 TGFß1-LAP 复合物，它们需要酸活化步骤，然后进行中和才能被检测（样品活化可以遵循右侧描述的方案之一）。试剂盒中提供了此激活步骤所需的试剂，以获得最大的便利性。标准品和活化样品直接分配到检测板（白色、小容量）板中，以便通过 HTRF® 试剂进行检测。

检测原理

将细胞上清液、样品或标准品直接分配到检测板中，以便通过 HTRF® 试剂（384 孔低容量白板或 20 μl 的 Revvity 低容量 96 孔板）进行检测。用 HTRF 供体和受体标记的抗体经过预混合，并在单个分液步骤中添加，以进一步简化检测程序。只需按比例调整每个添加体积的大小，即可运行至 1536 孔规格的分析。

测定内 （n=24）

测定间 （n=4）

用离子霉素和PMA刺激的PBMC细胞中人类TGFß1的分泌

用离子霉素 （1 μg/mL） 和浓度为 0.5 至 50 ng/mL 的 PMA，以 125 kcells/孔（96 孔板）在含有 4% FCS 的 RPMI 中以 125 kcells/孔（96 孔板）接种的人 PBMC 刺激 18 小时。转移到聚丙烯微管中后，先用酸活化试剂（5 μL，10 分钟，室温）处理 50 μL 上清液，然后用中和试剂 （5 μL） 处理。将 16 μL 转移至白色检测板中。推荐的对照包括单独的补充培养基和补充培养基中的未刺激细胞，以分别测定刺激培养基中的 TGF β 和基线浓度。

永生化 kupffer 细胞的小鼠 TGFß1 分泌

永生化小鼠 Kupffer 细胞 （ImKC） 以 650 kcell/孔（24 孔板）接种在含有 4% FCS 的 RPMI 中。静置 24 小时后，用 LPS 浓度从 0.05 到 5 μg/mL（终体积 500 μL/孔）的增加刺激细胞 16 小时。将 100 μL 上清液在室温下酸活化 （10 μL） 10 分钟，然后中和 （10 μL）。然后将 16 μL 活化的上清液转移至白色检测板（384 小体积）中，通过人 TGF β 1 检测进行分析。