肿瘤坏死因子 α(TNF-α)主要由活化的巨噬细胞产生,是急性期反应中的关键细胞因子之一。根据作用的细胞靶点及生物学背景不同,肿瘤坏死因子 α 可激活促凋亡通路或促存活通路,进而通过调控细胞凋亡参与组织发育过程。除肿瘤学和炎症领域外,肿瘤坏死因子 α 还会通过增加胰岛素抵抗、调节脂肪酸代谢,促进 2 型糖尿病的发生发展。
血清样本检测通常对灵敏度有更高要求。在部分情况下,AlphaLISA(Alpha 增强化学发光免疫分析)检测法的灵敏度足以实现对血清或血浆中低浓度分析物的检测。
将细胞上清液、样本或标准品直接加入检测板中,使用均相时间分辨荧光(HTRF®)试剂进行检测(采用 384 孔低体积白色检测板或瑞孚迪(Revvity)低体积 96 孔检测板,最终反应体积为 20 微升)。标记有 HTRF 供体荧光团和受体荧光团的抗体可预先混合,通过单次加样步骤加入,进一步简化检测流程。通过按比例调整各试剂的添加体积,该检测可拓展至 1536 孔板检测规格。
(标注:Cytokines-how-it-works-assay-principle-cynomolgus-tnf-alpha-62ctnfapeg,为图表 / 文件标识,保留原文)
通常推荐采用四参数逻辑斯蒂(4PL)曲线对酶联免疫吸附试验(ELISA)的标准曲线进行拟合。与线性分析相比,该回归模型能在更宽的浓度范围内实现对未知样本的准确定量,因此非常适合细胞因子释放等生物系统的分析。
注:对 3 个样本分别进行 24 次检测,并计算每个样本的变异系数(% CV)。
注:在 4 次独立实验中分别对每个样本进行检测,并计算每个样本的变异系数(% CV)。