概述
CCL5,也称为 RANTES(受活化调节、正常 T 细胞表达和分泌因子),是一种趋化因子,主要由 T 淋巴细胞、巨噬细胞、血小板和某些类型的肿瘤细胞分泌。RANTES 通过募集 T 细胞和巨噬细胞在炎症部位发挥重要作用。当与 IL-2 和 IFN-γ 一同分泌时,RANTES 还能诱导自然杀伤(NK)细胞的活化和增殖。RANTES 在肿瘤学中的作用尚不明确,但在感染性疾病中,已发现其可抑制 HIV 进入靶细胞。
血清样本的检测通常需要更高的灵敏度。在某些情况下,AlphaLISA 检测法可能具备足够的灵敏度,能够检测出血清或血浆中低水平的分析物。
作用机制
检测原理
将细胞上清液、样本或标准品直接加入检测板中,使用 HTRF® 试剂进行检测(采用 20μl 体系,384 孔低体积白板或 Revvity 96 孔低体积板)。预先混合标记有 HTRF 供体和受体的抗体,通过单次加样步骤加入,以进一步简化检测流程。通过按比例调整各添加体积,该检测可扩展至 1536 孔板格式。
检测数据分析
通常建议采用四参数 Logistic(4PL)曲线拟合酶联免疫吸附试验(ELISA)标准曲线。与线性分析相比,这种回归方法能够在更宽的浓度范围内准确测量未知样本,因此非常适合分析细胞因子释放等生物系统。
检测详情
人 CCL5 试剂盒技术规格
分析性能
批内与批间检测
检测验证
经脂多糖(LPS)、白细胞介素 1β(IL1β)和肿瘤坏死因子 α(TNFα)刺激的外周血单个核细胞(PBMC)中 CCL5 的分泌
将外周血单个核细胞以 100,000 个细胞 / 孔的密度接种到 96 孔板中,分别用 200μg/mL 的 LPS、10ng/mL 的 IL1β 和 10ng/mL 的 TNFα 刺激 24 小时。将上清液稀释至 1/3,取 16μL 稀释后的样本转移至 384 孔(SV)白色检测板中,用人 CCL5 检测试剂盒进行分析。
assay-validation-human-ccl5(标注:图表 / 文件标识,保留原文)
经转化生长因子 β(TGFβ)刺激的 LX2 细胞中 CCL5 的分泌
将 LX2 细胞以 400,000 个细胞 / 孔的密度接种到 6 孔板中,培养 3 天,饥饿处理 1 天后,用 0.5ng/ml 的 TGFβ 刺激 48 小时。随后,取 16μL 上清液转移至 384 孔(SV)白色检测板中,用人 CCL5 检测试剂盒进行分析。
assay-validation-human-ccl5(标注:图表 / 文件标识,保留原文)
规格参数