概述
干扰素 γ(IFN gamma)是一种促炎细胞因子,由 T 细胞和自然杀伤(NK)细胞在病毒感染或炎症状态下分泌。干扰素 γ 在先天免疫和适应性免疫中发挥重要作用,它可促进 T 细胞分化为辅助性 T 细胞 1(TH1)、调节性 T 细胞(Treg)的发育,同时抑制 T 细胞分化为辅助性 T 细胞 17(TH17)。其抗肿瘤特性已被用于骨质疏松症的治疗,且在免疫肿瘤学领域备受关注,可提高膀胱癌或卵巢癌患者的生存率。
血清样本的检测通常需要更高的灵敏度。在某些情况下,AlphaLISA 检测法的灵敏度足以检测出血清或血浆中低水平的分析物。
工作原理
检测原理
将细胞上清液、样本或标准品直接加入检测板中,使用 HTRF® 试剂进行检测(采用 384 孔小体积白色板或 Cisbio 小体积 96 孔板,总反应体积为 20 µl)。标记有 HTRF 供体和受体的抗体预先混合后,通过单次加样步骤加入,以进一步简化检测流程。只需按比例调整各步加样体积,该检测即可适用于 1536 孔板格式。
干扰素 γ 试剂盒检测原理
检测数据分析
四参数逻辑(4PL)曲线通常被推荐用于拟合 ELISA 标准曲线。与线性分析相比,这种回归方法能在更宽的浓度范围内准确测量未知样本,因此非常适合分析细胞因子释放等生物系统。
检测详情
人干扰素 γ 试剂盒的技术规格
样本量:16 µL
最终检测体积:20 µL
试剂盒组成:冻干标准品、冷冻检测抗体、缓冲液及说明书
检测限(LOD)和定量限(LOQ)(在稀释液中):14 pg/mL 和 21 pg/mL
检测范围:21 – 4,000 pg/mL
出结果时间:室温下过夜
校准:NIBSC(82/587)值(IU/mL)= 0.019 × HTRF 人干扰素 γ 值(pg/mL)
适用物种:仅适用于人类
分析性能
批内和批间检测
批内检测(n=24)
每个样本测量 24 次,并计算每个样本的变异系数(% CV)。
批间检测(n=4)
每个样本在 4 个不同的实验中进行测量,并计算每个样本的变异系数(% CV)。
稀释线性
这些实验中获得的优异回收率表明该检测具有良好的线性。
加标回收率
向两种不同的血清样本中加入等量的重组细胞因子,将标准曲线得到的一组响应值与计算出的预期值进行比较。观察到的约 100% 的回收率验证了本检测所用的样本基质。
检测验证
经佛波酯(PMA)和离子霉素刺激的外周血单个核细胞(PBMC)中干扰素 γ 的分泌
将外周血单个核细胞以 50、100、200 和 400 k 细胞 / 孔的密度接种,用不同浓度的佛波酯(0、1、50 ng/mL)加入 500 ng/mL 离子霉素溶液中刺激 3 小时。然后将 16 µL 上清液转移至白色检测板(384 孔,小体积)中,用人干扰素 γ 检测试剂盒进行分析。
经佛波酯和离子霉素刺激的外周血单个核细胞中干扰素 γ 的分泌
规格参数
其他规格参数
应用:蛋白质定量
品牌:HTRF
检测方式:HTRF
产品类别:试剂盒
样本体积:16 µL
运输条件:干冰运输
靶标类别:细胞因子
靶标物种:人类
技术:时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)
治疗领域:肿瘤学与炎症
单位规格:96 个检测点