登录 注册 购物车 13310039714

当前位置:首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Cytokines > HTRF (H) IL12/23 P40 KIT - 500 PTS 人白细胞介素12/23 p40亚基检测试剂盒,500测试

概述

p40 是 p40 家族细胞因子的共有组成部分,该家族包含白细胞介素 12(IL-12,p40+p35 异二聚体)、白细胞介素 23(IL-23,p40+p19 异二聚体)、p40 单体及 p80 同源二聚体(p40+p40)。通过检测这一共享亚基 p40,可实现对上述 4 种细胞因子的共同检测。这些细胞因子在炎症反应和免疫调节中发挥关键作用。

工作原理

🔬 检测原理

  1. 将细胞上清液样本或标准品直接加入检测板,使用 HTRF® 试剂进行检测(检测板为 384 孔小体积白色板或 Revvity 96 孔小体积板,总反应体积 20 微升)。
  2. 标记有 HTRF 供体和受体的抗体预先混合,通过单次加样步骤加入,进一步简化检测流程。
  3. 只需按比例调整各试剂加样体积,该检测即可适配 1536 孔板格式。


(标注:cytokines-how-it-works-assay-protocol,即 “细胞因子检测操作流程示意图”)

🎯 p40 家族检测特性

  • 该检测仅适用于人源样本,对 p40 具有高度特异性。
  • 可与所有含 p40 的细胞因子交叉反应,包括 IL-12、IL-23、p40 单体及 p40-p40(p80)二聚体。


(标注:cytokines-how-it-works-assay-principle,即 “细胞因子检测原理示意图”)

📊 检测数据分析

  1. 酶联免疫吸附试验(ELISA)标准曲线拟合通常推荐使用四参数逻辑(4PL)曲线,相比线性分析,能在更宽浓度范围内准确测量未知样本,适合细胞因子释放等生物系统分析。
  2. 如需深入了解 HTRF 数据处理及 4PL 1/y² 拟合方法,可访问相关说明页面;Revvity 还与Myassays.com合作,提供免费在线软件用于 IL12/23 p40 检测数据分析(点击链接即可使用)。

检测详情

📈 标准曲线

IL12/23 p40 标准曲线需使用试剂盒提供的Diluent 5(稀释液 5) 制备。


(标注:specification-il12-il23-p40-standard,即 “IL12/23 p40 标准品规格示意图”)

📋 检测规格

规格项目具体参数
样本量16 微升
最终检测体积20 微升
试剂盒组成冻干标准品、冷冻检测抗体、缓冲液及说明书
检测限(LOD)& 定量限(LOQ)- 稀释液中15 皮克 / 毫升 & 71 皮克 / 毫升
检测限(LOD)& 定量限(LOQ)- DMEM+10% FCS 中56 皮克 / 毫升 & 96 皮克 / 毫升
检测限(LOD)& 定量限(LOQ)- RPMI+10% FCS 中55 皮克 / 毫升 & 109 皮克 / 毫升
检测范围71–10000 皮克 / 毫升
出结果时间室温下过夜
国际标准品对应关系英国国家生物标准与控制研究所(NIBSC)(95/544)IL12 值(国际单位 / 毫升)= 0.01 × HTRF 人 IL12/23 p40 检测值(皮克 / 毫升)
适用物种仅人类

分析性能

🔍 批内与批间检测

批内检测(n=24,同批次重复检测 24 次)

样本IL12/23 p40 平均值(皮克 / 毫升)变异系数(CV)
12189.4%
247977.6%
384998.3%
-平均变异系数8.4%
注:样本为经刺激的 THP1 细胞培养上清液。

批间检测(n=3,3 个独立实验 / 3 天)

样本IL12/23 p40 平均值(皮克 / 毫升)变异系数(CV)
11917.6%
247391.7%
381384.6%
-平均变异系数4.6%
注:样本为经刺激的 THP1 细胞培养上清液。

📉 稀释线性

稀释倍数IL12/23 p40 预期值(皮克 / 毫升)IL12/23 p40 实测值(皮克 / 毫升)稀释回收率
原液(Neat)-6073.4100%
23036.72837.791%
41518.31379.191%
8759.2610.380%
16379.6310.782%
32189.8169.089%
-汇总-89%
注:样本为经 DIL5 试剂盒稀释液梯度稀释的 THP1 细胞上清液,优异的回收率表明检测具有良好的稀释线性。


🧪 抗原加标回收率

样本IL12/23 p40 标准品(皮克 / 毫升)加标样本 IL12/23 p40(皮克 / 毫升)预期值(皮克 / 毫升)实测值(皮克 / 毫升)回收率
12886614890349444105%
128055691-5885103%
113654251-4529107%
21410273241424353105%
213122723-2908107%
26612071-2126103%
398272370413112%
3111209-259124%
345143-184129%
----平均回收率111%
注:向 THP1 细胞上清液样本中加入 3 个浓度梯度的重组 p40,将实测响应值与计算预期值对比,近 100% 的回收率表明样本与试剂盒标准品的细胞因子检测结果一致性良好。




🧬 交叉反应性

检测蛋白交叉反应性
人 p40 单体100%
人 p40 同源二聚体(p40+p40=p80)65%
人 IL12(p40+p35=p70)62%
人 IL23(p40+p19)51%
小鼠 p40 同源二聚体(p40+p40=p80)0%
小鼠 IL120%
小鼠 IL230%
大鼠 IL120%
大鼠 IL230%
注:使用 p40 家族重组蛋白评估交叉反应性,蛋白检测浓度最高达 10000 皮克 / 毫升并绘制标准曲线,信号值通过检测标准曲线插值计算浓度;交叉反应性为 116–10000 皮克 / 毫升范围内 6 个检测浓度的平均值,该检测对人源特异性强,无法检测小鼠和大鼠的 p40 家族细胞因子。

检测验证

🧫 LPS 刺激人 THP1 单核细胞分泌 IL12/23 p40

  1. 以脂多糖(LPS)为激动剂,用人单核细胞系 THP1 研究 IL12/23 p40 的分泌:THP1 细胞在含 10% 胎牛血清(FCS)的 RPMI1640 培养基中,于 37℃、5% 二氧化碳条件下培养。
  2. 取 50 微升悬浮状态的 THP1 细胞,以 20 万 / 孔和 40 万 / 孔的密度接种至 96 孔细胞培养板,用浓度递增的 LPS(终体积 100 微升)刺激 24 小时。
  3. 取 16 微升上清液转移至白色检测板(384 孔小体积),加入 4 微升 HTRF 人 IL12/23 p40 检测试剂,室温过夜孵育后记录 HTRF 信号。
  4. 结果显示:LPS 浓度越高,IL12/23 p40 分泌量越多;40 万 / 孔细胞密度的检测浓度更低,表明 20 万 / 孔是该悬浮细胞模型研究细胞因子分泌的最佳密度。


(标注:assay-validation,即 “检测验证示意图”)

产品规格

📦 其他规格参数

规格类别具体内容
应用(Application)蛋白质定量(Protein Quantification)
品牌(Brand)HTRF
检测方式(Detection Modality)HTRF(均相时间分辨荧光)
动态范围(Dynamic Range)71–10000 皮克 / 毫升
检测限(Limit of Detection)15 皮克 / 毫升
定量限(Limit of Quantification)71 皮克 / 毫升
产品类别(Product Group)试剂盒(Kit)
样本体积(Sample Volume)16 微升
运输条件(Shipping Conditions)干冰运输(Shipped in Dry Ice)
靶标类别(Target Class)细胞因子(Cytokines)
靶标物种(Target Species)人类(Human)
技术(Technology)TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移)
单位规格(Unit Size)500 个检测点(500 assay points)


    没有数据
    没有数据
    没有数据