p40 是 p40 家族细胞因子的共有组成部分,该家族包含白细胞介素 12(IL-12,p40+p35 异二聚体)、白细胞介素 23(IL-23,p40+p19 异二聚体)、p40 单体及 p80 同源二聚体(p40+p40)。通过检测这一共享亚基 p40,可实现对上述 4 种细胞因子的共同检测。这些细胞因子在炎症反应和免疫调节中发挥关键作用。
- 将细胞上清液样本或标准品直接加入检测板,使用 HTRF® 试剂进行检测(检测板为 384 孔小体积白色板或 Revvity 96 孔小体积板,总反应体积 20 微升)。
- 标记有 HTRF 供体和受体的抗体预先混合,通过单次加样步骤加入,进一步简化检测流程。
- 只需按比例调整各试剂加样体积,该检测即可适配 1536 孔板格式。
(标注:cytokines-how-it-works-assay-protocol,即 “细胞因子检测操作流程示意图”)
- 该检测仅适用于人源样本,对 p40 具有高度特异性。
- 可与所有含 p40 的细胞因子交叉反应,包括 IL-12、IL-23、p40 单体及 p40-p40(p80)二聚体。
(标注:cytokines-how-it-works-assay-principle,即 “细胞因子检测原理示意图”)
- 酶联免疫吸附试验(ELISA)标准曲线拟合通常推荐使用四参数逻辑(4PL)曲线,相比线性分析,能在更宽浓度范围内准确测量未知样本,适合细胞因子释放等生物系统分析。
- 如需深入了解 HTRF 数据处理及 4PL 1/y² 拟合方法,可访问相关说明页面;Revvity 还与Myassays.com合作,提供免费在线软件用于 IL12/23 p40 检测数据分析(点击链接即可使用)。
IL12/23 p40 标准曲线需使用试剂盒提供的Diluent 5(稀释液 5) 制备。
(标注:specification-il12-il23-p40-standard,即 “IL12/23 p40 标准品规格示意图”)
- 以脂多糖(LPS)为激动剂,用人单核细胞系 THP1 研究 IL12/23 p40 的分泌:THP1 细胞在含 10% 胎牛血清(FCS)的 RPMI1640 培养基中,于 37℃、5% 二氧化碳条件下培养。
- 取 50 微升悬浮状态的 THP1 细胞,以 20 万 / 孔和 40 万 / 孔的密度接种至 96 孔细胞培养板,用浓度递增的 LPS(终体积 100 微升)刺激 24 小时。
- 取 16 微升上清液转移至白色检测板(384 孔小体积),加入 4 微升 HTRF 人 IL12/23 p40 检测试剂,室温过夜孵育后记录 HTRF 信号。
- 结果显示:LPS 浓度越高,IL12/23 p40 分泌量越多;40 万 / 孔细胞密度的检测浓度更低,表明 20 万 / 孔是该悬浮细胞模型研究细胞因子分泌的最佳密度。
(标注:assay-validation,即 “检测验证示意图”)