本试剂盒是基于 HTRF 技术的均相检测工具,专为定量细胞上清液中的人 IL13 设计,相比 ELISA 更快速高效,且在炎症相关研究中(如过敏、哮喘)适用性强。
- 核心功能:在过敏性炎症、气道疾病和哮喘中起关键作用,可调节 IgE 合成、诱导 B 细胞抗体类别转换,还能促进初始 T 细胞分化为 Th2 细胞;与 IL4 结构相似,免疫细胞作用机制相近。
- 额外作用:在非免疫细胞中,可诱导成纤维细胞产生基质金属蛋白酶(MMPs),避免过度过敏炎症导致的窒息。
- 来源与信号通路:由 Th2 细胞、CD4 + 细胞、调节性 T 细胞(Tregs)、自然杀伤细胞(NK)等多种细胞分泌;分泌后结合 IL13Ra1,与 IL4Ra 形成 II 型 IL4R 异源复合物,激活 Jak1、Tyk2 及下游 STAT3/6 信号通路。
- 均相检测:“加样 - 读数” 两步完成,无需洗板步骤,操作简化,减少误差。
- 高灵敏度:稀释液中检测限(LOD)低至 6 皮克 / 毫升,定量限(LOQ)为 17 皮克 / 毫升,可精准检测低浓度 IL13。
- 灵活适配:支持 384 孔、96 孔板,按比例调整体积可适配 1536 孔高通量检测,500 检测点规格适合中等规模实验需求。
- 直接将细胞上清液、样本或标准品加入检测板(384 孔小体积白色板或 Revvity 96 孔小体积板),终反应体积为 20 微升。
- 标记 HTRF 供体和受体的抗体已预先混合,单次加样即可完成反应,大幅缩短操作流程,避免洗板带来的样本损失。
(标注:1cytokines-how-it-works-assay-principle-human-il13-62hil13peg-62hil13peh.svg,即 “人 IL13 检测原理示意图”)
- 推荐使用四参数逻辑(4PL)曲线拟合 ELISA 标准曲线,相比线性分析,能在 17–5000 皮克 / 毫升的检测范围内准确测量未知样本,适配细胞因子释放的生物特性。
- 数据支持:如需深入了解 HTRF 数据处理及 4PL 1/y² 拟合方法,可参考相关技术资料;Revvity 也提供数据分析辅助支持,提升结果可靠性。
- 结论:批内变异系数低(平均 9%),同批次检测稳定性优异,结果一致性高,可减少单次实验误差。
- 结论:跨批次检测变异系数低(平均 6%),试剂盒性能稳定,不同实验间结果可重复,适合长期实验使用。
- 实验说明:向含已知 IL13 浓度(1669 皮克 / 毫升)的 RPMI+10% FCS 细胞上清液中,加入两种浓度的重组 IL13,按 1:1 体积比混合;回收率达 90%,表明样本基质对检测无显著干扰,结果可靠。
- 实验设计:人外周血单核细胞(PBMCs)以 10 万细胞 / 孔的密度接种到 96 孔板,加入 100 微升完全 RPMI 培养基,用 0.4–50 微克 / 毫升的植物血凝素(PHA)梯度刺激。
- 检测步骤:培养 3 天后,取 16 微升上清液转移至白色检测板,使用本试剂盒进行分析。
- 实验意义:验证试剂盒可有效检测生理刺激条件下细胞分泌的 IL13,适用于炎症相关的细胞功能研究。
(标注:2assay-validation-human-il13-1.svg,即 “人 IL13 检测验证示意图”)