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HTRF HUMAN IL13 KIT - 10K PTS

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品牌： Revvity

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概述

白细胞介素 13（IL-13）通过调控免疫球蛋白 E（IgE）合成及诱导 B 细胞抗体类别转换，在过敏性炎症、气道疾病和哮喘中发挥关键作用。IL-13 还可诱导初始 T 细胞分化为辅助性 T 细胞 2（Th2 细胞），其对免疫细胞的作用与 IL-4 相似（二者二级结构相近）。在免疫细胞外，IL-13 能诱导成纤维细胞产生基质金属蛋白酶（MMPs），这是一种在过度过敏性炎症中避免窒息的保护机制。人 IL-13 由 Th2 细胞、CD4+T 细胞、调节性 T 细胞（Tregs）、自然杀伤细胞（NK 细胞）、肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞以及上皮细胞产生。IL-13 分泌后会与 IL-13 受体 α1（IL13Ra1）结合，后者再与 IL-4 受体 α（IL4Ra）形成 II 型 IL-4 受体异源复合物，进而激活 Jak1、Tyk2 激酶，并通过 STAT3/STAT6 通路启动下游信号传导。

HTRF 人 IL-13 检测试剂盒是一种均相 “加样 - 读数” 型检测工具，可用于定量细胞上清液中的 IL-13 分泌量，是酶联免疫吸附试验（ELISA）的快速高效替代方案。

血清样本检测通常需要更高的灵敏度。在某些情况下，AlphaLISA 检测技术的灵敏度足以实现对血清或血浆中低浓度分析物的检测。

工作原理

检测原理

将细胞上清液、样本或标准品直接加至检测板中，使用 HTRF® 试剂进行检测（检测板为 384 孔小体积白色板或 Revvity 96 孔小体积板，反应终体积为 20 微升）。标记有 HTRF 供体和受体的抗体已预先混合，通过单次加样即可完成操作，进一步简化了检测流程。只需按比例调整各试剂的加样体积，该检测即可适配最高 1536 孔板的检测格式。

（附图标注：1cytokines-how-it-works-assay-principle-human-il13-62hil13peg-62hil13peh.svg，即 “人 IL-13 检测原理示意图”）

检测数据分析

酶联免疫吸附试验（ELISA）标准曲线拟合通常推荐使用四参数逻辑（4PL）曲线。与线性分析相比，这种回归方法能在更宽的浓度范围内准确测量未知样本，因此非常适合细胞因子释放等生物系统的分析。

如需全面了解如何处理 HTRF 数据，以及四参数逻辑 1/y² 拟合（4PL 1/y² fitting）的方法，

Revvity 也会提供数据分析支持。

检测详情

人 IL-13 检测试剂盒技术规格

规格项目	参数
样本用量	16 微升
反应终体积	20 微升
试剂盒组成	冻干标准品、冷冻检测抗体、缓冲液及说明书
检测限（LOD）与定量限（LOQ）- 稀释液中	6 皮克 / 毫升 & 17 皮克 / 毫升
检测范围	17–5000 皮克 / 毫升
出结果时间	室温下过夜
校准关系	英国国家生物标准与控制研究所（NIBSC）（94/622）标准品浓度（国际单位 / 毫升）= 0.0012 × HTRF 人 IL-13 检测值（皮克 / 毫升）
适用物种	仅人类

分析性能

批内与批间检测

批内检测（n=24，即同批次重复检测 24 次）

样本	IL-13 平均浓度（皮克 / 毫升）	变异系数（CV）
1	50	8%
2	2500	10%
3	4000	9%
-	平均变异系数	9%

对 3 个样本分别进行 24 次重复检测，并计算每个样本的变异系数（% CV）。

批间检测（n=4，即 4 次独立实验）

样本	IL-13 浓度（皮克 / 毫升）	平均 delta R 值（荧光信号差值）	变异系数（CV）
1	78	685	9%
2	411	2780	5%
3	5000	13729	3%
-	-	-	平均 CV 6%

对每个样本在 4 次独立实验（不同日期）中进行检测，并计算每个样本的变异系数（% CV）。

加标回收率

样本	加入 IL-13 浓度（皮克 / 毫升）	预期 IL-13 浓度（皮克 / 毫升）	检测 IL-13 浓度（皮克 / 毫升）	回收率
1	945	1307	1181	90%
2	2174	1922	1728	90%

向已知 IL-13 浓度（1669 皮克 / 毫升）的 RPMI 培养基 + 10% 胎牛血清（FCS）细胞上清液中，加入两种不同浓度的重组 IL-13 细胞因子，样本按 1:1 体积比混合。将标准曲线得出的响应值与计算得出的预期值进行比较，所得回收率可验证该检测所用样本基质的适用性。

检测验证

植物血凝素（PHA）刺激外周血单核细胞（PBMCs）分泌 IL-13 实验

将人外周血单核细胞（PBMCs）以 10 万个细胞 / 孔的密度接种到 96 孔板中，每孔加入 100 微升完全 RPMI 细胞培养基，随后用浓度递增的植物血凝素（PHA，0.4–50 微克 / 毫升）进行刺激。培养 3 天后，取 16 微升上清液转移至白色检测板中，使用人 IL-13 检测试剂盒进行分析。

（附图标注：2assay-validation-human-il13-1.svg，即 “人 IL-13 检测验证示意图”）

规格参数

其他规格

规格类别	具体内容
应用领域	蛋白质定量
品牌	HTRF
检测方式	HTRF（均相时间分辨荧光）
产品类别	试剂盒
样本体积	16 微升
运输条件	干冰运输
靶标类别	细胞因子
靶标物种	人类
技术原理	TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
治疗领域关联	炎症
单位规格	10000 个检测点

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货号：62HIL13PEH

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