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HTRF HP HUMAN IL1 BETA KIT - 10K PTS

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品牌： Revvity

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概述

白细胞介素 - 1β（IL-1β），又称白细胞热原或单核细胞因子，是 IL-1 家族中的一种促炎细胞因子。IL-1β 被认为是主要的内源性热原，可诱导前列腺素合成、T 细胞活化、B 细胞活化以及后续的抗体产生，同时也是已知的可促进 T 细胞分化为 Th17 细胞的因子。

血清样本检测通常需要更高的灵敏度。在某些情况下，AlphaLISA 检测的灵敏度足以检测出血清或血浆中低水平的分析物。如需了解更多信息，可查看人源 IL-1β AlphaLISA 试剂盒的分析性能，或进一步了解 AlphaLISA 技术。检测时，需始终遵循推荐方案，并避免使用严重溶血的样本。

作用原理

检测原理

将细胞上清液、样本或标准品直接加入检测板中，使用 HTRF 试剂进行检测（检测板可选用 384 孔小体积白色板或 Revvity 96 孔小体积板，反应体积为 20 微升）。偶联 HTRF 供体荧光团和受体荧光团的抗体已预先混合，可通过单次加样步骤加入，进一步简化检测流程。该检测可轻松调整至 1536 孔板格式，只需按比例调整各试剂的添加体积即可。

（标注：1assay-principle-hp-il1-62hil1b2pet-62hil1b2peg-62hil1b2peh.svg，即 “人源 IL-1β 检测原理示意图”）

检测数据分析

四参数逻辑斯蒂（4PL）曲线是拟合 ELISA 标准曲线的常用方法。与线性分析相比，这种回归方法能在更宽的浓度范围内对未知样本进行准确定量，非常适合细胞因子释放等生物系统的分析。

为帮助您充分掌握 HTRF 数据处理及 4PL 1/y² 拟合方法，Revvity 与Myassays.com合作提供支持。您可访问免费的在线软件进行 IL-1β 检测数据分析。

检测详情

人源 IL-1β 标准曲线

IL-1β 标准曲线使用试剂盒中提供的 5 号检测稀释液配制生成。

（标注：2assay-specifications-hp-il1-62hil1b2pet-62hil1b2peg-62hil1b2peh.svg，即 “人源 IL-1β 标准曲线示意图”）

人源 IL-1β 检测规格

样本量：16 微升
最终检测体积：20 微升
试剂盒组成：冻干标准品、冷冻检测抗体、缓冲液及检测方案
检测限与定量限（稀释液中）：8.3 皮克 / 毫升、18.8 皮克 / 毫升
检测限与定量限（含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养基中）：11.3 皮克 / 毫升、26.7 皮克 / 毫升
检测限与定量限（含 10% 胎牛血清的 RPMI 培养基中）：15.3 皮克 / 毫升、28.5 皮克 / 毫升
检测范围：75.8–6500 皮克 / 毫升
出结果时间：室温下 4 小时
与国际标准品对应关系：NIBSC（86/680）单位值（国际单位 / 毫升）= 0.07×HTRF 人源 IL-1β 检测值（皮克 / 毫升）
适用物种：仅人

分析性能

板内与板间重复性

板内重复性（n=24）

对 3 个样本分别进行 24 次检测并计算变异系数（CV）：样本 1 的 IL-1β 平均值为 73.7 皮克 / 毫升，变异系数 7%；样本 2 的平均值为 714.4 皮克 / 毫升，变异系数 2%；样本 3 的平均值为 3406.8 皮克 / 毫升，变异系数 2%；3 个样本的平均变异系数为 4%。

板间重复性（n=4）

对 3 个样本分别在 4 次独立实验中检测并计算变异系数（CV）：样本 1 的 IL-1β 平均值为 76 皮克 / 毫升，变异系数 9%；样本 2 的平均值为 702 皮克 / 毫升，变异系数 8%；样本 3 的平均值为 3095 皮克 / 毫升，变异系数 4%；3 个样本的平均变异系数为 7%。

稀释线性

实验中获得的优异回收率表明该检测具有良好的稀释线性。实验样本为外周血单个核细胞（PBMC）上清液，使用试剂盒中的 5 号稀释液（DIL5）进行系列稀释。具体结果如下：未稀释时 IL-1β 检测值为 951 皮克 / 毫升；稀释 1.5 倍后，预期值 655 皮克 / 毫升、检测值 610 皮克 / 毫升、回收率 93%；稀释 2.25 倍后，预期值 436 皮克 / 毫升、检测值 442 皮克 / 毫升、回收率 101%；稀释 3.37 倍后，预期值 291 皮克 / 毫升、检测值 287 皮克 / 毫升、回收率 99%；稀释 5.07 倍后，预期值 194 皮克 / 毫升、检测值 202 皮克 / 毫升、回收率 104%；平均回收率为 99%。

抗原加标回收率

向 PBMC 上清液样本中加入重组细胞因子，将检测结果与计算得出的预期值进行比较。回收率达到 100% 表明，样本中细胞因子的检测结果与试剂盒标准品的检测结果具有一致性。具体结果如下：

样本 1：加标后 IL-1β 浓度为 982 皮克 / 毫升（标准品浓度 3095 皮克 / 毫升），预期值 2039 皮克 / 毫升、检测值 1972 皮克 / 毫升、回收率 97%；加标后浓度为 334 皮克 / 毫升（标准品浓度 658 皮克 / 毫升），预期值 637 皮克 / 毫升、检测值 637 皮克 / 毫升、回收率 97%。
样本 2：加标后 IL-1β 浓度为 574 皮克 / 毫升（标准品浓度 3095 皮克 / 毫升），预期值 1835 皮克 / 毫升、检测值 1720 皮克 / 毫升、回收率 94%；加标后浓度为 334 皮克 / 毫升（标准品浓度 454 皮克 / 毫升），预期值 384 皮克 / 毫升、检测值 384 皮克 / 毫升、回收率 84%。
平均回收率：93%。

交叉反应性

使用 IL-1 细胞因子家族的重组蛋白评估交叉反应性。所有蛋白均测试至 6500 皮克 / 毫升的浓度，并为每种蛋白绘制标准曲线，将检测信号在试剂盒标准曲线上进行插值以计算浓度。结果显示，该检测具有人源特异性，未检测到小鼠 IL-1β 的交叉反应，具体交叉反应性如下：人源 IL-1β 为 100%，人源 IL-1α 为 0%，小鼠 IL-1β 为 0%。

检测验证

THP1 细胞系中 IL-1β 分泌的调控

将 THP1 细胞分别以每孔 2.5 万、5 万、10 万个细胞的密度接种，用佛波酯（PMA，浓度 50 纳克 / 毫升）和脂多糖（LPS，浓度 1 微克 / 毫升）刺激 18 小时。将 16 微升上清液转移至白色检测板（384 孔小体积）中，使用人源 IL-1β 检测试剂盒进行分析。

（标注：3assay-validation-hp-il1-62hil1b2pet-62hil1b2peg-62hil1b2peh-01.svg，即 “THP1 细胞系中 IL-1β 分泌调控检测结果图”）

脂多糖（LPS）刺激 PBMC 分泌 IL-1β

将 PBMC 分别以每孔 5 万、10 万、20 万个细胞的密度接种，用不同浓度的 LPS（0.02–2 微克 / 毫升）刺激 18 小时。将 16 微升上清液转移至白色检测板（384 孔小体积）中，使用人源 IL-1β 检测试剂盒进行分析。

（标注：4assay-validation-hp-il1-62hil1b2pet-62hil1b2peg-62hil1b2peh-02.svg，即 “LPS 刺激 PBMC 分泌 IL-1β 检测结果图”）

地塞米松对 PBMC 中 IL-1β 释放的影响

将 PBMC 分别以每孔 5 万、10 万个细胞的密度接种，用 0.2 微克 / 毫升的 LPS 刺激，并同时加入不同浓度的地塞米松（0.05–50 微克 / 毫升）共同处理 18 小时。将 16 微升上清液转移至白色检测板（384 孔小体积）中，使用人源 IL-1β 检测试剂盒进行分析。

（标注：5assay-validation-hp-il1-62hil1b2pet-62hil1b2peg-62hil1b2peh-03.svg，即 “地塞米松对 PBMC 中 IL-1β 释放影响的检测结果图”）

规格参数

应用领域：蛋白质定量
品牌：HTRF
检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
产品类别：试剂盒
样本体积：16 微升
运输条件：干冰运输
靶点类别：细胞因子
靶点物种：人
技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
单位规格：10,000 个检测点

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货号：62HIL1B2PEH

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