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HTRF TGF BETA 1 KIT - 10K PTS

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品牌： Revvity

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概述

转化生长因子 β1（TGF-β1）是调控细胞外基质（ECM）合成与降解的关键细胞因子之一，同时也是重要的促纤维化因子。TGF-β1 前体蛋白经加工后会生成 latency 相关肽（LAP， latency-associated peptide）与成熟 TGF-β1 肽段，二者通过强非共价相互作用保持结合状态。要从 TGF-β1-LAP 复合物中释放出具有活性的 TGF-β1，需经过激活步骤（如 MMP2 酶切激活或酸激活）。

血清样本检测通常需要更高的灵敏度。在某些情况下，扩增发光均相免疫分析（AlphaLISA）检测法的灵敏度足以检测出血清或血浆中低水平的分析物。检测时，需始终遵循推荐的实验方案，并避免使用严重溶血的样本。

工作原理

激活步骤

样本和细胞培养上清液中同时存在 TGF-β1 与 TGF-β1-LAP 复合物，这类样本需先经过酸激活步骤，再进行中和处理，方可用于检测（样本激活可参考右侧所列方案之一）。试剂盒中已提供该激活步骤所需的试剂，为实验操作提供最大便利。将标准品和激活后的样本直接加入检测板（白色小体积板）中，使用均相时间分辨荧光（HTRF®）试剂进行检测。

（标注：1cytokines-how-it-works-activation-step-tgf-beta-1-62htgfbpeg-62htgfbpeh.svg，即 “TGF-β1 激活步骤示意图”）

检测原理

将细胞上清液、样本或标准品直接加入检测板中，使用 HTRF® 试剂进行检测（检测板可选用 384 孔小体积白色板或瑞孚迪（Revvity）96 孔小体积板，反应体积为 20 微升）。偶联 HTRF 供体荧光团与受体荧光团的抗体已预先混合，可通过单次加样步骤加入，进一步简化检测流程。该检测可轻松调整至 1536 孔板检测格式，只需按比例调整各试剂的添加体积即可。

（标注：1cytokines-how-it-works-assay-principle-human-il13-62hil13peg-62hil13peh.svg，即 “人源与鼠源 TGF-β1 检测原理示意图”）

检测详情

人源与鼠源 TGF-β1 试剂盒技术规格

样本量：16 微升
最终检测体积：20 微升
试剂盒组成：冻干标准品、冷冻检测抗体、缓冲液及实验方案
检测限（LOD）与定量限（LOQ）（稀释液中）：4 皮克 / 毫升、19 皮克 / 毫升
检测范围：19–2000 皮克 / 毫升
出结果时间：室温下孵育过夜（ON，Overnight）
校准：英国国家生物标准与控制研究所（NIBSC）标准品（89/514）单位换算公式为：NIBSC 值（单位 / 毫升）= 0.017 × HTRF 人源 TGF-β1 检测值（皮克 / 毫升）
适用物种：人、小鼠、牛（胎牛血清（FCS）添加比例最高可达 5%）；基于序列相似性，预计还可适用于其他物种；无法检测鸡源 TGF-β1
特异性：与人源 TGF-β2 和 TGF-β3 无交叉反应

分析性能

板内与板间重复性

板内重复性（n=24）

对 3 个样本分别进行 24 次检测，并计算浓度的变异系数（CV）：样本 1 的 TGF-β1 平均值为 28 皮克 / 毫升，变异系数 7%；样本 2 的平均值为 167 皮克 / 毫升，变异系数 8%；样本 3 的平均值为 704 皮克 / 毫升，变异系数 4%；3 个样本的平均变异系数为 6%。

（注：n=24 表示每个样本重复检测 24 次）

板间重复性（n=4）

对 3 个样本分别在 4 次独立实验中检测，并计算浓度的变异系数（CV）：样本 1 的 TGF-β1 浓度为 32 皮克 / 毫升，差值比平均值（delta ratio）为 114，变异系数 3%；样本 2 的 TGF-β1 浓度为 126 皮克 / 毫升，差值比平均值为 410，变异系数 6%；样本 3 的 TGF-β1 浓度为 322 皮克 / 毫升，差值比平均值为 1441，变异系数 2%；3 个样本的平均变异系数为 4%。

（注：n=4 表示每个样本在 4 次独立实验中分别检测；delta ratio 为 HTRF 检测中的信号差值比指标）

检测验证

离子霉素（Ionomycin）与佛波酯（PMA）刺激的外周血单个核细胞（PBMC）中 TGF-β1 的分泌检测

将人源 PBMC 以每孔 12.5 万个细胞的密度接种到 96 孔板中，培养基为含 4% 胎牛血清（FCS）的 RPMI 培养基；加入离子霉素（终浓度 1 微克 / 毫升）和不同浓度的佛波酯（PMA，浓度范围 0.5–50 纳克 / 毫升），刺激培养 18 小时。将上清液转移至聚丙烯微量离心管中，取 50 微升上清液加入 5 微升酸激活试剂，室温孵育 10 分钟后，再加入 5 微升中和试剂；取 16 微升处理后的上清液加入白色检测板中进行检测。推荐设置对照组：仅含完全培养基的空白对照（用于测定刺激培养基中的 TGF-β1 本底）、未刺激细胞的完全培养基组（用于测定 TGF-β1 基础分泌浓度）。

（标注：2assay-validation-tgf-beta-1-1.svg，即 “PBMC 细胞 TGF-β1 分泌检测结果图”）

永生化小鼠枯否细胞（ImKC）中 TGF-β1 的分泌检测

将永生化小鼠枯否细胞（ImKC）以每孔 65 万个细胞的密度接种到 24 孔板中，培养基为含 4% 胎牛血清（FCS）的 RPMI 培养基；静置培养 24 小时后，加入不同浓度的脂多糖（LPS，浓度范围 0.05–5 微克 / 毫升），刺激培养 16 小时（每孔终体积 500 微升）。取 100 微升上清液加入 10 微升酸激活试剂，室温孵育 10 分钟后，再加入 10 微升中和试剂；取 16 微升激活后的上清液加入 384 孔白色小体积检测板中，使用人源 TGF-β1 检测试剂盒进行分析。

（标注：3assay-validation-tgf-beta-1-2.svg，即 “永生化小鼠枯否细胞 TGF-β1 分泌检测结果图”）

规格参数

应用领域：蛋白质定量
品牌：HTRF（均相时间分辨荧光技术）
检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
产品类别：试剂盒
样本体积：16 微升
运输条件：干冰运输
靶点类别：细胞因子
靶点物种：人、小鼠
技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
治疗领域：代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化、肿瘤学与炎症
单位规格：10000 个检测点

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货号：62HTGFBPEH

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