TNF-α 是一种主要由巨噬细胞、T 细胞和中性粒细胞产生的细胞因子。TNF-α 可作为中性粒细胞的趋化因子,促进炎症部位的浸润和激活。TNF-α 通过促进血管生成、细胞增殖及抑制细胞凋亡,参与多种癌症的发生发展。
血清样本检测通常需要更高的灵敏度。在某些情况下,AlphaLISA 检测法可能具有足够的灵敏度,能够检测血清或血浆中低水平的分析物。检测时请务必遵循推荐方案,并避免使用高度溶血的样本。
将细胞上清液、样本或标准品直接加入检测板,使用 HTRF® 试剂(384 孔低体积白色板或 Revvity 低体积 96 孔板,20 µl 体系)进行检测。预先混合标记有 HTRF 供体和受体的抗体,并通过单次加样步骤加入,以进一步简化检测流程。该检测可通过按比例调整各加样体积,直接扩展至 1536 孔板格式。
推荐使用四参数逻辑(4PL)曲线拟合 ELISA 标准曲线。与线性分析相比,该回归模型可在更宽的浓度范围内准确测量未知样本,非常适合分析细胞因子释放等生物系统。
为帮助您全面理解 HTRF 数据处理及 4PL 1/y² 拟合方法,Revvity 与Myassays.com合作提供免费在线软件,支持您进行 TNF-α 数据分析。 - 样本体积:16 µL
- 最终检测体积:20 µL
- 试剂盒组分:冻干标准品、冻存检测抗体、缓冲液及实验方案
- 检测限与定量限(在稀释液中):5 pg/mL & 29 pg/mL
- 检测范围:29–2,500 pg/mL
- 出结果时间:室温孵育 2 小时
- 校准:NIBSC(12/154)值(IU/mL)= 0.1 × HTRF hTNF-α 值(pg/mL)
- 适用物种:仅限人类
批内检测(n=24)
样本 | 平均 [TNF-α](pg/mL) | 变异系数(CV) |
---|
1 | 113 | 6% |
2 | 344 | 3% |
3 | 1399 | 6% |
平均 CV | 5% |
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每个样本检测 24 次,计算各样本的 % CV。
批间检测(n=4)
样本 | [TNF-α](pg/mL) | 平均(delta R) | 变异系数(CV) |
---|
1 | 78 | 272 | 11% |
2 | 312 | 911 | 7% |
3 | 1250 | 2894 | 6% |
平均 CV | 6% |
|
|
每个样本在 4 次不同实验中检测,计算各样本的 % CV。
实验获得的优异回收率表明该检测具有良好的线性。
样本 | 稀释倍数 | [TNF-α] 预期值(pg/mL) | [TNF-α] 检测值(pg/mL) | 回收率 |
---|
1 | 1 | - | 2336 | - |
| 3 | 782 | 898 | 115% |
| 4.3 | 543 | 567 | 104% |
| 10.7 | 218 | 252 | 116% |
| 平均值 | 112% |
|
|
2 | 1 | - | 449 | - |
| 3 | 150 | 179 | 119% |
| 平均值 | 119% |
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样本 | [TNF-α] 加入量(pg/mL) | [TNF-α] 预期值(pg/mL) | [TNF-α] 检测值(pg/mL) | 回收率 |
---|
1 | 1,250 | 1,555 | 1,523 | 98% |
2 | 1,250 | 1,874 | 1,892 | 101% |
将 THP1 细胞以 100 kcells / 孔铺板,用浓度递增的 JTE607 孵育 18 小时,再用 2 µg/mL LPS 刺激 3 小时。然后将 16 µL 上清液转移至白色检测板(384 孔低体积),使用人 TNF-α 检测试剂盒进行分析。
将 PBMC 以 50、100、200 和 400 kcells / 孔铺板,用浓度递增的 LPS(0, 0.02, 0.2, 2 µg/mL)刺激 3 小时。然后将 16 µL 上清液转移至白色检测板(384 孔低体积),使用人 TNF-α 检测试剂盒进行分析。
- 应用:蛋白质定量
- 品牌:HTRF
- 检测方式:HTRF
- 产品类别:试剂盒
- 样本体积:16 µL
- 运输条件:干冰运输
- 靶标类别:细胞因子
- 靶标物种:人类
- 技术:TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移)
- 治疗领域:代谢 / 糖尿病、NASH / 肝纤维化、肿瘤与炎症
- 单位规格:500 检测点