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当前位置:首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Cytokines > HTRF MOUSE CCL2 KIT - 10K PTS

概述


CCL2 又称 MCP-1(单核细胞趋化蛋白 - 1),是一种趋化因子,主要由单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞分泌,可趋化单核细胞、嗜碱性粒细胞和 T 细胞。它参与银屑病、动脉粥样硬化等疾病过程:在脑部,神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞会释放 CCL2,参与缺血或阿尔茨海默病中的神经炎症反应;脂肪细胞也会分泌 CCL2,且可能干扰胰岛素信号传导,提示其在糖尿病相关炎症中发挥作用。
血清样本检测通常需要更高灵敏度,AlphaLISA 检测法有时具备足够灵敏度,可检测血清或血浆中的低浓度分析物。检测时需严格遵循推荐流程,并避免使用严重溶血的样本。


工作原理

检测原理

将细胞上清液、样本或标准品直接加至检测板中(使用 384 孔低体积白板或 Revvity 低体积 96 孔板,反应体积 20 微升),再通过单步加样加入预混合的 HTRF 供体和受体标记抗体,进一步简化检测流程。该检测可扩展至 1536 孔板格式,只需按比例调整各试剂的添加体积即可。
(配图说明:1cytokines-how-it-works-assay-principle-human-il13-62hil13peg-62hil13peh.svg)

检测数据分析

通常推荐使用四参数逻辑斯蒂(4PL)曲线拟合 ELISA 标准曲线。与线性分析相比,这种回归方法能在更宽的浓度范围内准确测定未知样本,非常适合细胞因子释放等生物系统的分析。
为帮助使用者充分掌握 HTRF 数据处理及 4PL 1/y² 拟合方法,Revvity 与Myassays.com合作提供支持,使用者可通过免费在线软件进行 CCL2 检测数据分析。


检测详情

小鼠 CCL2(MCP-1)试剂盒技术规格

  • 样本用量:16 微升(µL)
  • 最终检测体积:20 微升(µL)
  • 试剂盒组成:冻干标准品、冷冻检测抗体、缓冲液及操作说明书
  • 检测限(LOD)与定量限(LOQ)(在稀释液中):6 皮克 / 毫升(pg/mL)、13 皮克 / 毫升(pg/mL)
  • 检测范围:13–1800 皮克 / 毫升(pg/mL)
  • 出结果时间:室温(RT)孵育过夜
  • 校准:无相关信息(NA)
  • 适用物种:仅小鼠(Mouse only)


分析性能

批内与批间精密度

  • 批内精密度(n=24):样本 1 的 CCL2 平均浓度为 173pg/mL,变异系数(CV)5%;样本 2 平均浓度 561pg/mL,CV 2%;样本 3 平均浓度 1594pg/mL,CV 2%;所有样本平均 CV 为 3%。
  • 批间精密度(n=4):样本 1 的 CCL2 浓度 72pg/mL,平均 delta 比值 722,CV 10%;样本 2 浓度 263pg/mL,平均 delta 比值 3102,CV 11%;样本 3 浓度 960pg/mL,平均 delta 比值 12960,CV 16%;所有样本平均 CV 为 12%。


检测验证

IL-1β 和 TNF-α 刺激 3T3-L1 细胞后的 CCL2 分泌检测

将 3T3-L1 细胞 * 接种于 12 孔板,每孔 30,000 个细胞,培养基体积 1 毫升。细胞培养至融合后,分化为脂肪细胞(每孔约 700,000 个细胞)。分化后的细胞用 10ng/mL 的 IL-1β(白细胞介素 - 1β)和 TNF-α(肿瘤坏死因子 -α)刺激 24 小时,将上清液稀释 100 倍后,取 16 微升稀释后的上清液转移至 384 孔(SV)白色检测板,使用小鼠 CCL2 检测试剂盒进行分析。
* 样本由法国尼斯 Inserm U1065 “肥胖细胞与分子病理生理学” 研究团队的 J.F. Tanti(J・F・坦蒂)提供。
(配图说明:10assay-validation-mouse-ccl2-1.svg)


规格参数


  • 其他规格:无相关详细信息(原文未提供具体内容)
  • 应用领域:蛋白质定量
  • 品牌:HTRF(均相时间分辨荧光共振能量转移技术,Homogeneous Time-Resolved Fluorescence 缩写,为该类检测常用技术品牌标识)
  • 检测方式:HTRF(均相时间分辨荧光共振能量转移技术)
  • 产品类别:试剂盒(Kit)
  • 样本体积:16 微升(µL)
  • 运输条件:干冰运输(Shipped in Dry Ice)
  • 目标类别:细胞因子(Cytokines)
  • 目标物种:小鼠(Mouse)
  • 技术类型:TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移技术,Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer 缩写)
  • 治疗领域:代谢 / 糖尿病(Metabolism/Diabetes)、非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化(NASH/Fibrosis)、肿瘤学与炎症(Oncology & Inflammation)
  • 单位规格:10,000 次检测用量(10,000 assay points)


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