概述

SIRT1（沉默信息调节因子 1）属于沉默信息调节因子 2（Sir2）蛋白家族的 III 类成员，该家族蛋白为组蛋白 / 蛋白去乙酰化酶（去乙酰化酶类，sirtuins）。研究表明，SIRT1 调节剂有望成为治疗多种疾病的潜在治疗手段，涉及癌症、糖尿病、衰老、神经退行性疾病、代谢性疾病及心血管疾病等。本检测方法快速简便，可区分多酚类化合物，适用于高通量筛选，助力发现 SIRT1 活性的抑制剂与激活剂。

工作原理

检测原理

HTRF（均相时间分辨荧光）SIRT1 检测采用两种关键试剂：偶联铕穴状化合物（Eu-cryptate）的抗乙酰化特异性单克隆抗体（MAb），以及偶联 d2 荧光基团的乙酰化底物。在无 SIRT1 存在时，检测信号达到最大值；随着去乙酰化过程的进行，信号强度成比例降低。因此，去乙酰化肽段的量与信号衰减程度直接相关。epigenetics-how-it-works-assay-principle-sirt1（图示：SIRT1 检测原理）

检测方案

该检测分为两步：酶促反应步骤与通用检测步骤。

1. 酶促反应步骤：将 SIRT1 酶与含或不含待测化合物的乙酰化 d2 标记底物共同孵育，加入烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD⁺）启动反应；
2. 通用检测步骤：加入偶联铕穴状化合物的单克隆抗体，检测缓冲液中含乙二胺四乙酸（EDTA）和 SIRT 抑制剂（烟酰胺），用于终止酶促反应。

epigenetics-how-it-works-assay-protocol-sirt1（图示：SIRT1 检测方案）

分析性能

筛选稳健性

选取 4 种特定浓度的 SIRT1 酶，每种浓度进行 24 次重复检测，以测定 Z' 值（评估筛选方法稳健性的指标）：

• 0 毫单位（mU）酶：无去乙酰化反应；
• 100 毫单位酶：100% 去乙酰化反应；
• 10 毫单位酶：对应半数有效浓度（EC50）；
• 20 毫单位酶：对应 80% 有效浓度（EC80）。

analytical-performance-sirt-1-kit-1（图示：SIRT1 检测的筛选稳健性结果）

激活剂与抑制剂化合物的筛选

采用 3 类化合物绘制滴定曲线，用于筛选 SIRT1 的激活剂与抑制剂：

• 两种多酚类化合物：白藜芦醇（resveratrol）、白皮杉醇（piceatannol）；
• 两种非多酚类化合物：激活剂 1（activator1）、激活剂 2（activator2）；
• 一种参照抑制剂：烟酰胺（nicotinamide）。

analytical-performance-sirt-1-kit-2（图示：SIRT1 激活剂与抑制剂的滴定曲线结果）

规格参数

其他规格参数

• 应用领域：生化酶促检测
• 品牌：HTRF
• 检测方式：均相时间分辨荧光（HTRF）
• 产品类别：试剂盒
• 样本体积：10 微升（µL）
• 运输条件：干冰运输
• 靶点类别：表观遗传学相关蛋白
• 技术平台：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
• 治疗领域：代谢 / 糖尿病、神经科学、肿瘤学与炎症
• 单位规格：1000 个检测点