概述
HTRF KinEASE 试剂盒系列提供了一种简单的生化方法,用于研究激酶活性、筛选激酶抑制剂并对其进行表征。三个丝氨酸 / 苏氨酸激酶(STK)试剂盒和一个酪氨酸激酶(TK)试剂盒分别为评估丝氨酸 / 苏氨酸残基和酪氨酸残基上的磷酸化情况提供了一种半通用的方法。HTRF KinEASE TK 检测方法已使用单一通用底物在 71 种酪氨酸激酶上得到了验证。本页面的检测验证部分列出了这些激酶,并提供了实验设置方面的技术提示。
规格
其他规格
- 应用:生化酶促检测
- 品牌:HTRF
- 检测方式:HTRF
- 产品类别:试剂盒
- 运输条件:常温运输
- 靶标类别:激酶
- 技术:时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)
- 治疗领域:代谢性疾病 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化、肿瘤 & 炎症
- 单位规格:100,000 个检测点数
作用原理
检测原理
每个 HTRF KinEASE 试剂盒都基于相同的检测形式,并且使用一种通用的生物素化底物、一种磷酸化特异性的铕穴状化合物(Eu-cryptate)标记的单克隆抗体以及链霉亲和素 - XL665(SA-XL665)。酪氨酸激酶(TK)通用底物由一系列重复基序组成,这些基序可被大多数酪氨酸激酶识别,并且在磷酸化后能被特异性偶联抗体识别。
检测方案
如下所示,所有 HTRF KinEASE 检测的操作方式相同,且包含两个步骤:
步骤 1:激酶反应
将激酶在存在或不存在化合物以及合适底物的情况下进行孵育。仅对于酪氨酸激酶,需在激酶缓冲液中添加补充的酶促缓冲液。添加三磷酸腺苷(ATP)以启动反应。
步骤 2:检测
添加铕穴状化合物标记物和 XL665 偶联物。检测缓冲液中含有乙二胺四乙酸(EDTA),用于终止酶促反应。
