HTRF KinEASE 试剂盒系列提供了一种简单的生化方法来研究激酶活性、筛选抑制剂并对其进行表征。三个丝氨酸 / 苏氨酸激酶(STK)试剂盒和一个酪氨酸激酶(TK)试剂盒分别为评估丝氨酸 / 苏氨酸和酪氨酸残基的磷酸化提供了一种半通用的方法。HTRF KinEASE STK S1 检测法已在 56 种丝氨酸 / 苏氨酸激酶上得到验证。本页面的检测验证部分列出了这些激酶,并提供了实验设置的技术提示。该试剂盒系列还包括一个发现试剂盒,用于在研究未经验证的酶时帮助确定三种 STK 试剂盒中哪种是合适的。
- 检测原理:每个 HTRF KinEASE 试剂盒都基于相同的检测模式,使用通用的生物素化底物、磷酸特异性的铕 - 隐花青标记单克隆抗体和链霉亲和素 - XL665。所有三种 STK 肽底物都具有相同的用于抗体检测的序列,旁边是被酶识别的可变序列。磷酸化的目标残基位于这两个序列之间,既是酶活性(未磷酸化)的一部分,也是抗体检测(磷酸化)的一部分。已经表明,3 种不同的可变序列能够用于研究大多数丝氨酸 / 苏氨酸激酶。
- 检测方案:如图所示,所有 HTRF KinEASE 检测的工作方式相同,包括两个步骤:
- 检测验证:点击下面的表格可查看酶的列表、推荐使用的试剂盒,并下载包含实验设置和验证数据的技术数据表。未列出的丝氨酸 / 苏氨酸激酶(STK)可以用发现试剂盒进行评估,以确定可以使用哪种 HTRF KinEASE STK 试剂盒。
- 已验证的激酶:已有超过 190 种丝氨酸 / 苏氨酸激酶和酪氨酸激酶通过 HTRF KinEASE 试剂盒得到验证。其中,有 56 种被发现与 S1 试剂盒兼容。丝氨酸 / 苏氨酸激酶 SIK 的情况如下所示,包括酶滴定和时间进程(左图)以及星形孢菌素的抑制作用(右图)。

