概述
HTRF KinEASE 试剂盒系列提供了一种简单的生化方法,用于研究激酶活性、筛选抑制剂并对其进行表征。其中 3 种丝氨酸 / 苏氨酸激酶(STK)试剂盒和 1 种酪氨酸激酶(TK)试剂盒,分别为评估丝氨酸 / 苏氨酸和酪氨酸残基的磷酸化提供了半通用方法。HTRF KinEASE STK S1 试剂盒已在 56 种丝氨酸 / 苏氨酸激酶上得到验证。本页面的检测验证部分列出了这些激酶,并提供了实验设置的技术提示。该试剂盒系列还包括一款探索试剂盒,当研究未经验证的酶时,可帮助确定 3 种 STK 试剂盒中哪一种适用。
工作原理
每个 HTRF KinEASE 试剂盒都基于相同的检测格式,使用通用的生物素化底物、磷酸化特异性铕穴状化合物标记单克隆抗体和链霉亲和素 - XL665(SA-XL665)。所有 3 种 STK 肽底物都包含相同的抗体检测序列,紧邻一个被酶识别的可变序列。磷酸化的靶残基位于两者之间,既是酶活性(未磷酸化时)的一部分,也是抗体检测(磷酸化时)的一部分。研究表明,3 种不同的可变序列可用于研究大多数丝氨酸 / 苏氨酸激酶。
如下所示,所有 HTRF KinEASE 检测的工作原理相同,包括两个步骤:
- 步骤 1:激酶反应
在存在或不存在化合物以及适当底物的情况下孵育激酶。仅在酪氨酸激酶缓冲液中添加补充的酶缓冲液。加入 ATP 启动反应。 - 步骤 2:检测
加入铕 ³⁺穴状化合物和 XL665 偶联物。检测缓冲液中含有 EDTA,用于终止酶促反应。
检测验证
目前,该平台已在以下激酶上得到验证:
KinEASE STK S1
AMPK α2/β1/γ1、BrSK2、CAMK1、CaMK1 α、CaMK2 α、CaMK2 d、CaMK2 g、CaMK2 β、CAMK2B、CAMK2D、CAMK2G、CaMK4、CHEK1、CHEK2、CHK1、CHK2、DAPK1、DAPK2、DAPK3、DCAMKL2、DRAK1、GPRK4、GRK4、GRK6、GSG2、Haspin、IRAK4、LATS1、LKB1、MAPKAP-K1α、MAPKAP-K1 β、MAPKAP-K2、MAPKAP-K3、MAPKAP-K5、MARK1、MELK、MKNK1、MKNK2、MLCK、MNK1、MNK2、MYLK、PASK、PHK g1、PHK g2、PKC µ、PKCα、PKC d、PKC ε、PKC η、PKC γ、PKC ι、PKC β1、PKC β2、PKC θ、PKC ζ、PKD2、PKG2、PKN2、PLK1、PRAK、PRK2、PRKA α2/β1/γ1、PRKCA、PRKCB1、PRKCB2、PRKCD、PRKCE、PRKCG、PRKCH、PRKCI、PRKCQ、PRKCZ、PRKD2、PRKG2、RPS6KA1、RPS6KA2、RPS6KA3、RSK1、RSK2、RSK3、SIK、smMLCK、STK22B、STK22D、TBK1、TSSK1、TSSK2、ZIPK
已有超过 190 种丝氨酸 / 苏氨酸和酪氨酸激酶在 HTRF KinEASE 试剂盒上得到验证。其中 56 种与 S1 试剂盒兼容。以下以 SIK 丝氨酸 / 苏氨酸激酶为例,左侧为酶滴定和时间进程,右侧为星形孢菌素的抑制作用。
- 应用:生化酶检测
- 品牌:HTRF
- 检测方式:HTRF
- 产品类别:试剂盒
- 样本体积:10 µL
- 运输条件:常温运输
- 靶标类别:激酶
- 技术:时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)
- 治疗领域:代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 肝纤维化、肿瘤学与炎症
- 单位规格:100,000 次检测