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HTRF STAT3 P-Y705 KIT - 10K PTS 磷酸化STAT3(Y705)检测试剂盒 - 10,000测试

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概述

这种基于 HTRF 细胞的检测能够快速、定量地检测在 Tyr705 上磷酸化的 STAT3，作为 JAK/STAT 信号活性的读数。STAT3 在许多癌症中上调，使其成为抗癌研究的有力工具。

规格

其他规格

检测点	96
检测靶标类型	工具箱
检测技术	HTRF
品牌	HTRF
数量	1
治疗领域	传染病 NASH/纤维化神经肿瘤学和炎症罕见病
单位面积	96 个检测点

视频库

运作方式

Phospho-STAT3 （Tyr705）检测原理

Phospho-STAT3 （Tyr705）检测可测量在 Tyr705 位点被磷酸化的 STAT3。与 Western Blot 相反，该检测完全基于板，不需要凝胶、电泳或转移。Phospho-STAT3 （Tyr705）检测使用 2 种标记抗体：一种具有供体荧光团，另一种具有受体。选择第一种抗体是因为它与蛋白质上的磷酸化基序特异性结合，第二种抗体是因为它能够独立于其磷酸化状态识别蛋白质。蛋白质磷酸化能够形成涉及标记抗体的免疫复合物，并使供体荧光团靠近受体，从而产生 FRET 信号。其强度与样品中存在的磷酸化蛋白浓度成正比，并提供了一种在免洗检测形式下评估蛋白磷酸化状态的方法。

Phospho-STAT3 （Tyr705） 2 板检测方案

2 板方案包括裂解前在 96 孔板中培养细胞，然后将裂解物转移到 384 孔低体积检测板中，然后添加磷酸化 STAT3 （Tyr705） HTRF 检测试剂。该协议可以监测细胞的活力和汇合度。

Phospho-STAT3 （Tyr705） 1 板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 STAT3 （Tyr705）可以在用于培养、刺激和裂解的单个板中进行。无需清洗步骤。这种 HTS 设计的方案可实现小型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。

Phospho 工作原理 phospho stat3 tyr705 细胞测定 1 板实验步骤

检测验证

HTRF 与使用磷酸化 STAT3 检测的 Western Blot 的比较

HeLa 细胞在 37°C、5% CO2 的 T175 培养瓶中生长 2 天。用 5 nM 的 IFNa 刺激 15 分钟。去除细胞培养基，在孵育 45 分钟前向细胞补充 3 ml 裂解缓冲液。离心 10 min 后收集可溶性上清液。使用等量的裂解物对 WB 和 HTRF 进行并排比较。这两种方法显示出相当的灵敏度水平：750 个细胞。HTRF 比 western blot 具有更高的便利性。

NIH 3T3 细胞上的 IL6 剂量反应

小鼠 NIH 3T3 细胞（100,000 个细胞/孔）在 37°C 下用不同浓度的 IL6 刺激 30 分钟。裂解孵育 30 分钟后，使用 HTRF phopsho-STAT3 （Tyr705）细胞检测试剂盒的两板检测方案测量磷酸化 STAT3。

JAK 抑制剂对 HeLa 细胞的抑制作用

将 HeLa 细胞（100,000 个细胞/孔）与不同浓度的拮抗剂在 37°C 下孵育 1 小时。然后加入激动剂（IFNα）并孵育 30 分钟。裂解孵育 30 分钟后，使用 HTRF phopsho-STAT3 （Tyr705）细胞检测试剂盒的两板检测方案测量磷酸化 STAT3。

HTRF total-STAT3 检测用于检查 STAT3 的磷酸化状态

使用 Phospho-STAT3 （Tyr705）和 Total-STAT3 检测的两板检测方案，用 IFNa 激活 Hela 细胞（100,000 个细胞/孔）15 分钟。获得的结果显示 IFNα 刺激后 STAT3 磷酸化的剂量反应增加，而 STAT3 表达水平保持不变。

简化的途径

细胞因子受体信号转导中的 STAT3

在细胞因子和生长因子的刺激下，STAT3 被受体相关激酶磷酸化，然后形成二聚体，这些二聚体易位到细胞核，在那里它们充当转录激活剂。STAT3 介导响应细胞刺激的多种基因的表达，因此在细胞生长和细胞凋亡等许多细胞过程中起关键作用。白细胞介素 6 家族细胞因子与 gp130 受体的结合触发 JAK2 的 STAT3 磷酸化。STAT3 也是其他受体的靶标，例如 RTK（EGFR、cmet.）和 c-src。

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货号：62AT3PEH

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