HTRF FGFR2 P-Y653/654 KIT - 500 PTS 成纤维细胞生长因子受体磷酸化Y653/654测量试剂盒 - 500测试

概述

规格

其他规格

• 应用领域：细胞信号传导
• 品牌：HTRF
• 检测方式：均相时间分辨荧光（HTRF）
• 裂解缓冲液兼容性：裂解缓冲液 2、裂解缓冲液 3、裂解缓冲液 4、裂解缓冲液 5
• 分子修饰类型：磷酸化
• 产品类别：试剂盒
• 样本体积：16 微升
• 运输条件：干冰运输
• 作用靶点类别：磷酸化蛋白
• 作用靶点物种：人类
• 技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
• 治疗领域：肿瘤与炎症、罕见病
• 包装规格：500 个检测点

工作原理

磷酸化 FGFR2（酪氨酸 653/654 位点）检测原理

磷酸化 FGFR2（酪氨酸 653/654 位点）检测方法用于测量在酪氨酸 653/654 位点发生磷酸化的 FGFR2。与蛋白质免疫印迹法（Western Blot）不同，该检测方法完全基于微孔板，无需凝胶、电泳或转膜步骤。磷酸化 FGFR2（酪氨酸 653/654 位点）检测使用两种标记抗体：一种带有供体荧光团，另一种带有受体荧光团。选择第一种抗体是因为它能特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，选择第二种抗体是因为它能够识别该蛋白质，且与蛋白质的磷酸化状态无关。蛋白质磷酸化会促使形成涉及两种标记抗体的免疫复合物，这使得供体荧光团与受体荧光团紧密接近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号的强度与样品中存在的磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，并提供了一种在无需洗涤的检测形式下评估蛋白质磷酸化状态的方法。

磷酸化 FGFR2（酪氨酸 653/654 位点）双板检测方案

双板检测方案包括先在 96 孔板中培养细胞，细胞裂解后，将裂解物转移到 384 孔低体积检测板中，然后再加入磷酸化 FGFR2（酪氨酸 653/654 位点）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

磷酸化 FGFR2（酪氨酸 653/654 位点）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 FGFR2（酪氨酸 653/654 位点）可以在用于细胞培养、刺激和裂解的单个微孔板中进行。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案在实现小型化的同时，仍能保持可靠的 HTRF 检测质量。

检测验证

评估不同人源癌细胞系中 FGFR 蛋白水平

对每个细胞系取 25 微克总蛋白（KG-1 细胞系取 15 微克），分析其总 FGFR1、FGFR2、FGFR3 和 FGFR4 蛋白水平。将 16 微升标准化后的样品转移到 384 孔低体积白色微孔板中，加入 4 微升每种 HTRF 总 FGFR1、FGFR2、FGFR3 或 FGFR4 检测抗体。孵育过夜后记录 HTRF 信号。结果揭示了四种不同 FGFR 受体的差异表达模式。FGFR1 在 DMS114 肺癌模型细胞和 KG-1 骨髓髓性白血病模型细胞中高表达，FGFR2 优先在 SNU-16 和 Kato-III 胃癌模型细胞中表达，FGFR3 在 KMS-11 多发性骨髓瘤细胞系中表达，FGFR4 在 MDA-MD-453 乳腺癌模型细胞或 HuH7 肝癌细胞系中表达。此外，这些结果证明了 HTRF 总 FGFR 试剂盒的识别特异性。

使用磷酸化 FGFR2（酪氨酸 653/654 位点）和总 FGFR2 试剂盒在 SNU-16 细胞中检测抑制作用

正如预期的那样，得到的结果显示，在用 AZD4547 处理后，FGFR2 酪氨酸 653/654 位点的磷酸化水平呈剂量反应性抑制，而 FGFR2 的表达水平保持不变。

使用磷酸化 FGFR2（酪氨酸 653/654 位点）和总 FGFR2 试剂盒在 Kato-III 细胞中检测抑制作用

正如预期的那样，得到的结果显示，在用 AZD4547 处理后，FGFR2 酪氨酸 653/654 位点的磷酸化水平呈剂量反应性抑制，而 FGFR2 的表达水平保持不变。

使用磷酸化 FGFR2（酪氨酸 653/654 位点）和总 FGFR2 试剂盒在 NCI-H716 细胞中检测抑制作用

正如预期的那样，得到的结果显示，在用 AZD4547 处理后，FGFR2 酪氨酸 653/654 位点的磷酸化水平呈剂量反应性抑制，而 FGFR2 的表达水平保持不变。

HTRF 磷酸化 FGFR2（酪氨酸 653/654 位点）检测方法与蛋白质免疫印迹法（Western Blot）的比较

蛋白质免疫印迹法和 HTRF 的平行比较表明，至少在这些实验条件下，HTRF 检测方法的灵敏度比蛋白质免疫印迹法高 16 倍。

简化的信号通路

简化的 FGFR 信号通路