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HTRF AMPK P-T172 KIT - 500 PTS 磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶测量试剂盒- 500测试
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品牌： Revvity
概述
5' AMP 活化蛋白激酶 （AMPK） 被认为是代谢主开关。AMPK 被 CaMKK2 和 LKB1 在 Thr172 位点的磷酸化激活。激活后，它抑制脂肪酸、胆固醇和甘油三酯的合成，激活脂肪酸摄取和 ß-氧化，以及刺激葡萄糖摄取。AMPK 还通过 ULK1 的直接磷酸化参与自噬激活。Revvity 的基于细胞的均相 HTRF 试剂盒磷酸化 AMPK （Thr172） 能够定量检测在苏氨酸 172 位点磷酸化的 AMP 活化蛋白激酶调节。
磷酸化 AMPK （Thr172） 检测可测量在 Thr172 位点被磷酸化的 AMPK。与 Western Blot 相反，该检测完全基于板，不需要凝胶、电泳或转印。磷酸化 AMPK （Thr172） 检测使用 2 种标记抗体：一种带有供体荧光团，另一种带有受体。选择第一种抗体是因为它与蛋白质上的磷酸化基序特异性结合，第二种抗体是因为它能够独立于其磷酸化状态识别蛋白质。蛋白质磷酸化能够形成涉及标记抗体的免疫复合物，并使供体荧光团靠近受体，从而产生 FRET 信号。其强度与样品中存在的磷酸化蛋白浓度成正比，并提供了一种在免洗检测形式下评估蛋白磷酸化状态的方法。 2 板方案包括裂解前在 96 孔板中培养细胞，然后将裂解物转移到 384 孔低体积检测板中，然后添加磷酸化 AMPK （Thr172） HTRF 检测试剂。该协议可以监测细胞的活力和汇合度。 使用 HTRF 试剂检测磷酸化 AMPK （Thr172） 可以在用于培养、刺激和裂解的单个板中进行。无需清洗步骤。这种 HTS 设计的方案可实现小型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。 将 50,000 个人 HepG2 细胞接种在 96 孔板中，并在 37 °C - 5% CO2 下孵育 24 小时。与浓度递增的 Dorsomorphin 孵育 4 小时后，去除培养基，并在室温下用 50 μL 裂解缓冲液轻轻摇动裂解细胞 30 分钟。将 16 μL 裂解物转移至 384 孔 sv 白色微孔板中，并加入 4 μL HTRF 磷酸化 AMPK （Thr172） 检测试剂。孵育过夜后记录 HTRF 信号。 将 50,000 或 100,000 个细胞接种在 96 孔板中，并在 37 °C - 5% CO2 下孵育 24 小时。与浓度递增的 H 2 O 2 孵育 10 分钟以诱导细胞应激后，去除培养基，并在室温下轻轻摇动，用 50 μL 裂解缓冲液裂解细胞 30 分钟。将 16 μL 裂解物转移至 384 孔 sv 白色微孔板中，并加入 4 μL HTRF 磷酸化 AMPK （Thr172） 检测试剂。孵育过夜后记录 HTRF 信号，并清楚地显示 AMPK 在 Thr172 位点的磷酸化增加。 磷酸腺苷单磷酸活化蛋白激酶 （AMPK） 在调节细胞代谢和代谢激素中起主要作用。它在Thr172上被磷酸化时被激活。 AMPK最初被定义为关键代谢酶乙酰辅酶A羧化酶（ACC1和ACC2）和HMG-CoA还原酶的上游激酶。AMPK 刺激分解代谢，同时抑制合成代谢途径，并直接影响下丘脑调节食欲。胰岛素合成的调节，特别是其在葡萄糖转运中的作用，使 AMPK 成为代谢疾病研究的有吸引力的靶标。 规格
检测靶标类型 工具箱品牌 HTRF治疗领域 新陈代谢/糖尿病NASH/纤维化单位面积 50,000 个检测点运作方式
磷酸化 AMPK （Thr172） 检测原理
磷酸化 AMPK （Thr172） 2 板检测方案
Phospho-AMPK （Thr172） 1 板检测方案
检测验证
Dorsomorphin 对 HepG2 肝细胞中磷酸化 AMPK 的抑制作用
细胞应激对小鼠 C2C12 细胞中 AMPK 磷酸化的影响。
简化的途径
AMPK 简化途径
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货号：64MPKPEG
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