HTRF (H) ADAR1 TOTAL KIT - 10K PTS

概述
ADAR1 是由 ADAR 基因编码的两种酶之一。它与双链 RNA（dsRNA）结合，并将其中的腺苷脱氨基转化为肌苷（次黄嘌呤）。ADAR 蛋白在转录后发挥作用，改变 RNA 的核苷酸组成。它们所进行的脱氨基作用会干扰常见的 A:U 配对，并使 RNA 结构不稳定。

ADAR1 和 ADAR2 调控机制的缺失与多种癌症的发生和发展相关，例如胶质母细胞瘤、黑色素瘤或急性白血病。除了在肿瘤发生过程中发挥作用外，ADAR 酶还被怀疑会加剧某些传染病（如艾滋病和麻疹）的病情，同时也与抑郁症、癫痫和精神分裂症等精神疾病的发生有关。

规格说明
其他规格
应用领域
细胞信号传导
品牌
HTRF
检测方式
HTRF（荧光共振能量转移技术）
裂解缓冲液兼容性
裂解缓冲液 1
裂解缓冲液 2
裂解缓冲液 3
分子修饰类型
总量检测
产品类别
试剂盒
样本体积
16 微升
运输条件
干冰运输
靶标类别
磷酸化蛋白
靶标物种
人类
技术
时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
包装规格
500 个检测点

工作原理

总 ATG16L1 检测方法原理
HTRF 总 ATG16L1 检测方法可对细胞裂解液中 ATG16L1 的表达水平进行定量。与蛋白质免疫印迹法（Western Blot）不同，该检测方法完全基于微孔板，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 ATG16L1 检测方法使用两种标记抗体，一种与供体荧光基团偶联，另一种与受体荧光基团偶联。这两种抗体对该蛋白质上不同的表位都具有高度特异性。在细胞提取物中存在 ATG16L1 的情况下，加入这些偶联物会使供体荧光基团与受体荧光基团紧密接近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。其强度与样品中存在的蛋白质浓度直接成比例，并提供了一种在无需洗涤的检测形式下评估蛋白质表达的方法。

总 ATG16L1 双板检测方案
双板检测方案包括在裂解细胞前于 96 孔板中培养细胞，然后在加入 HTRF 总 ADAR1 检测试剂之前，将细胞裂解液转移至低体积检测板（HTRF 384 孔低体积板或 96 孔低体积板）中。该方案能够对细胞活力和汇合度进行监测。

总 ATG16L1 单板检测方案
使用 HTRF 试剂检测总 ADAR1 可以在单个微孔板中进行，该微孔板用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现小型化，同时保持可靠的 HTRF 检测质量。

检测方法验证
在经 siRNA 处理的 HepG2 细胞中对总 ADAR1 检测方法的验证
将 HepG2 细胞以不同的细胞密度接种于 96 孔板中，每孔加入 80 微升完全培养基，然后在 37°C、5% 二氧化碳的条件下孵育过夜。培养后，通过加入 20 微升 Lipofectamine® RNAiMax/siRNA（针对 ADAR1）混合物对细胞进行 siRNA 处理，然后在 37°C、5% 二氧化碳的条件下孵育 24 小时和 48 小时。对于未处理的细胞，则加入 20 微升 OptMEM 培养基代替 siRNA 混合物。孵育后，使用 50 微升补充的 1X 裂解缓冲液 #1 在室温下轻轻摇晃裂解细胞 30 分钟，然后将 16 微升裂解液转移至低体积白色微孔板中，随后加入 2 微升 HTRF d2 检测试剂和 2 微升 HTRF Eu-K 检测试剂。在孵育过夜后记录 HTRF 信号。