HTRF ANDRO RECEPTOR KIT - 500 PTS 人雄激素受体检测试剂盒 - 500测试

HTRF 和 western blot 监测的细胞中人雄激素受体的降解

比较了 Western Blot 和 HTRF 人雄激素受体试剂盒监测的 ARCC-4 PROTAC 化合物对雄激素受体的剂量依赖性降解。将人前列腺癌细胞系 LNCaP 接种在 96 孔培养板中，在完全培养基中 75,000 个细胞/孔下接种，并在 37°C、5% CO2 下孵育过夜。用 ARCC-4 PROTAC 化合物处理细胞，浓度范围为 5 nM 至 10 000 nM，持续 24 小时。处理后，在 RT 中轻轻摇动，用 50 μL 补充的裂解缓冲液 # 3 裂解细胞 30 分钟。使用人雄激素受体试剂盒进行检测步骤时，将 16 μL 细胞裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，并加入 4 μL HTRF 人雄激素受体检测试剂。孵育 2 小时后记录 HTRF 信号。HTRF 人雄激素受体试剂盒能够测定 ARCC-4 PROTAC 化合物的 900 nM DC50（50% 的靶蛋白已被降解的浓度），以降解 LNCap 细胞中的人雄激素受体。通过 Western Blot 评估 ARCC-4 PROTAC 化合物对 LNCaP 细胞中表达的 AR-WT 和 AR-V7 形式的降解。结果表明，只有 AR-WT 被 ARCC-4 PROTAC 化合物降解，这解释了 HTRF 人雄激素受体试剂盒监测的部分降解，该试剂盒可以检测两种形式。ARCC-4 PROTAC 化合物降解 LNCap 细胞中人雄激素受体的 DC50 值与 HTRF 人雄激素受体试剂盒和 Western Blot 一致。

 

HTRF 人雄激素受体测定与 western blot 的比较

将人乳腺癌细胞在完全培养基中的 T175 培养瓶中，在 37°C、5% CO2 下培养 48 小时。在 RT 中轻轻摇动，用 3 mL 补充的裂解缓冲液 # 3 裂解细胞 30 分钟。使用补充的裂解缓冲液对细胞裂解液进行连续稀释，在加入 4 μL HTRF 人雄激素受体检测试剂之前，将每种稀释液的 16 μL 转移到低容量白色微孔板中。使用等量的裂解物对 HTRF 和 Western Blot 进行并排比较。使用 HTRF 人雄激素受体检测，1,500 个细胞/孔足以检测显著信号，而使用 Western Blot 需要 6,500 个细胞才能获得最小的化学发光信号。因此，在这些情况下，HTRF 人雄激素受体检测的灵敏度是 Western Blot 技术的 4.5 倍。