HTRF IR BETA TOTAL KIT - 50K PTS

概述

总胰岛素受体β检测可用于检测总胰岛素受体β。在胰岛素和胰岛素样生长因子的刺激下，胰岛素受体参与多个信号通路，如胰岛素信号通路和FoxO信号通路。工作原理

总胰岛素受体β检测原理 总胰岛素受体β检测用于定量细胞裂解物中胰岛素受体β的表达水平。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总胰岛素受体β检测使用两种标记抗体：一种偶联有供体荧光团，另一种偶联有受体荧光团。两种抗体都对该蛋白质上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在胰岛素受体β时，加入这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生FRET（荧光共振能量转移）信号。该信号强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比，且无需洗涤步骤即可评估蛋白质的表达水平。 总胰岛素受体β双板检测方案 双板方案包括先在96孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至384孔小体积检测板，再加入总胰岛素受体β HTRF检测试剂。此方案可监测细胞的活力和汇合度。 总胰岛素受体β单板检测方案 使用HTRF试剂检测总胰岛素受体β可在同一板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现小型化，同时保持稳定的HTRF质量。 检测验证 HepaRG细胞中总胰岛素受体β（Tyr1150/1151）的示例 将HepaRG细胞以200,000个细胞/孔的密度接种到96孔板中。在37°C、5% CO₂条件下培养5天后，向细胞中加入系列稀释的胰岛素（含30µM过钒酸盐），在37°C、5% CO₂条件下孵育5分钟。移除刺激培养基，向细胞中加入50µL裂解缓冲液。轻轻振荡30分钟完成裂解。将16µL样品转移至384孔小体积板中，然后加入4µL磷酸化胰岛素受体β HTRF检测试剂。同时，将16µL样品加入其他孔中，并加入4µL总胰岛素受体β HTRF检测试剂。过夜记录信号。 总胰岛素受体β与蛋白质印迹法的比较 将人Hek 293细胞培养至80%汇合度。经胰岛素和过钒酸盐共同处理后，裂解细胞，离心收集可溶性上清液。对细胞裂解物进行系列稀释，将16µL各稀释液转移至384孔小体积白色微孔板中，最后加入磷酸化胰岛素受体β HTRF细胞检测试剂盒试剂。对比结果显示，HTRF磷酸化检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的8倍。规格参数

其他规格 应用领域：细胞信号传导 品牌：HTRF 检测方式：HTRF 分子修饰：总量 产品类别：试剂盒 样品体积：16µL 运输条件：干冰运输 目标类别：磷酸化蛋白质 技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET） 治疗领域：代谢/糖尿病、神经科学 单位规格：50,000个检测点