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HTRF AMPK TOTAL KIT - 50K PTS

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概述

5'AMP 激活蛋白激酶（AMPK）被视为代谢总开关。AMPK 通过 CaMKK2 和 LKB1 等在 Thr172 位点的磷酸化而被激活。激活后，它会抑制脂肪酸、胆固醇和甘油三酯的合成，激活脂肪酸摄取和 β- 氧化，并刺激葡萄糖摄取。AMPK 还通过直接磷酸化 ULK1 参与自噬激活。Revvity 基于细胞的均相 HTRF 总 AMPK 试剂盒能够检测 AMPK 的表达水平，并与我们的磷酸化 AMPK（Thr172）试剂盒一起用作归一化检测。

工作原理

总 AMPK 检测原理

总 AMPK 检测可量化细胞裂解物中 AMPK 的表达水平。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于平板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 AMPK 检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体都对蛋白质上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 AMPK 时，添加这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团接近，从而产生 FRET 信号。其强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比，并提供了一种在无需洗涤的检测形式下评估蛋白质表达的方法。

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总 AMPK 双板检测方案

双板方案包括先在 96 孔板中培养细胞，然后裂解，再将裂解物转移到 384 孔小体积检测板中，之后添加总 AMPK HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

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总 AMPK 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 AMPK 可在单个平板中进行，该平板可用于培养、刺激和裂解细胞。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现小型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。

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检测验证

总 AMPK 试剂盒在小鼠和人类细胞中的验证

将细胞接种在 T175 培养瓶的完全培养基中，孵育 2 天直至达到 80% 汇合度。用 H₂O₂处理后，裂解细胞，离心 10 分钟后收集可溶性上清液。在补充的裂解缓冲液中对细胞裂解物进行系列稀释，将 16µL 每种稀释液转移到 384 孔小体积白色微孔板中，然后添加 4µL HTRF 总 AMPK 检测试剂。孵育过夜后记录 HTRF 信号。

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简化通路

AMPK 简化通路

腺苷一磷酸激活蛋白激酶（AMPK）在调节细胞代谢和代谢激素方面发挥重要作用。它在 Thr172 位点被磷酸化时激活。AMPK 最初被定义为关键代谢酶乙酰辅酶 A 羧化酶（ACC1 和 ACC2）和 HMG 辅酶 A 还原酶的上游激酶。AMPK 刺激分解代谢，同时抑制合成代谢途径，并直接作用于下丘脑以调节食欲。AMPK 对胰岛素合成的调节，特别是其在葡萄糖转运中的作用，使其成为代谢疾病研究的热门靶点。

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规格参数

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：总（蛋白）
产品类别：试剂盒
样品体积：16µL
运输条件：干冰运输
目标类别：磷酸化蛋白
目标物种：人类、小鼠
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎（NASH）/ 纤维化
单位规格：50,000 个检测点

没有数据

货号：63ADK060PEY

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