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HTRF P-LAMBAN TOTAL KIT - 50K PTS

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品牌： Revvity

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概述

总受磷蛋白（PLN）细胞检测试剂盒可作为我们磷酸化受磷蛋白试剂盒的归一化检测工具，其设计用于定量检测总受磷蛋白（包括磷酸化和非磷酸化形式）。HTRF 磷酸化受磷蛋白检测试剂盒与总受磷蛋白检测试剂盒的缓冲液具有兼容性，能够从同一份裂解液样本中同时分析磷酸化蛋白和总蛋白的含量。

工作原理

总受磷蛋白检测原理

总受磷蛋白检测可对细胞裂解液中受磷蛋白的表达水平进行定量分析。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总受磷蛋白检测采用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在受磷蛋白时，加入这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样本中蛋白质的浓度直接成正比，且无需洗涤步骤即可评估蛋白质的表达。

总受磷蛋白双板检测方案

双板方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解液转移至 384 孔低体积检测板，再加入总受磷蛋白 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞活力和汇合度。

总受磷蛋白单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总受磷蛋白可在单个微孔板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测验证

心脏匀浆中的总受磷蛋白检测

使用 Revvity 裂解缓冲液对自发性高血压大鼠（SHR）心脏样本和正常心脏样本进行匀浆处理，离心后收集上清液。将 16 µL 裂解液转移至 384 孔白色微量检测板中，加入 4 µL HTRF 总受磷蛋白检测试剂。室温孵育过夜后记录 HTRF 信号。

HTRF 总受磷蛋白检测与蛋白质印迹法的比较

使用 Revvity 裂解缓冲液对大鼠自发性高血压（SHR）心脏进行匀浆处理，离心 10 分钟后收集上清液。按照试剂盒说明书进行 HTRF 总 PLN 检测，并取等量样本与蛋白质印迹法（WB）进行平行比较。

结果显示，HTRF 总 PLN 检测的灵敏度优于 WB：HTRF 可检测到 1.5 µg/mL 的 PLN，而 WB 的检测阈值为 13 µg/mL。

简化通路

受磷蛋白（PLN）的简化通路

受磷蛋白（PLN）通过调控心肌肌浆网（SR）钙 ATP 酶（SERCA2a）在心力衰竭中发挥关键作用。SERCA2a 是一种位于肌浆网膜上的钙泵，激活后可将钙离子（Ca²⁺）泵入肌浆网。SERCA2a 活性不足是心力衰竭的一个标志性特征。去磷酸化的 PLN 会抑制 SERCA2a，而 PLN 在丝氨酸 16 位（Ser16）被 PKA 磷酸化或苏氨酸 17 位（Thr17）被 CaMKII 磷酸化后，会解除对 SERCA2a 的抑制。PLN 的磷酸化状态调控着这种钙泵的活性：PLN 去磷酸化驱动心脏舒张，磷酸化则与心脏收缩相关。

这种小分子蛋白存在于心肌、平滑肌和慢肌纤维骨骼肌中，但其调控作用主要在心肌中被研究。其激活机制尚未完全明确，但已知有两条主要通路分别导致两个不同位点的磷酸化：丝氨酸 16 位（Ser16）和苏氨酸 17 位（Thr17）。β 受体激动剂与受体结合后激活 G 蛋白，进而增强腺苷酸环化酶（AC）活性。AC 催化环磷酸腺苷（cAMP）生成，激活 PKA。PKA 可磷酸化 L 型钙通道（增加钙内流）、PP1 以及 PLN 的 Ser16 位。细胞内钙浓度升高会激活 CaMKII，其自身磷酸化状态也受 PP1 调控。CaMKII 进而磷酸化 PLN 的 Thr17 位。

规格参数

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：总蛋白
产品类别：试剂盒
样本体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
靶标物种：人
技术原理：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：心血管疾病
规格尺寸：50,000 个检测点

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货号：63ADK075PEY

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