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HTRF AKT3 TOTAL KIT - 50K PTS

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品牌： Revvity

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概述

Total AKT3 试剂盒旨在监测 AKT3 的表达水平，并可与我们的磷酸化 AKT3（Ser473）试剂盒配合使用，作为归一化检测工具。AKT 也被称为蛋白激酶 B（PKB），是一种癌基因，在调控细胞凋亡、细胞增殖、转录、细胞迁移和葡萄糖代谢中发挥关键作用。其中，AKT3 在神经科学领域尤为重要。

工作原理

Total-AKT3 检测原理

Total-AKT3 检测可对细胞裂解物中 AKT3 的表达水平进行定量分析。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。检测过程中使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均能特异性结合 AKT3 上的不同表位。当细胞提取物中存在 AKT3 时，加入的抗体结合物会使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。信号强度与样品中 AKT3 的浓度直接成正比，且该检测采用 “无需洗涤” 的形式，便于评估蛋白质的表达水平。

Total-AKT3 双板检测方案

双板方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔低体积检测板，再加入 Total AKT3 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

Total-AKT3 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 AKT3 可在单一微孔板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案支持实验微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测验证

Total AKT3 检测：封闭肽的抑制作用

将 SH-SY5Y 细胞用人类胰岛素样生长因子 - 1（IGF-1）刺激 15 分钟。刺激后，移除培养基，用 1X 裂解缓冲液在室温下轻柔振荡裂解细胞 30 分钟。取 14 µL 裂解物转移至 384 孔白色微量板中，加入 2 µL 不同浓度的 AKT3 特异性封闭肽，随后加入 4 µL HTRF total AKT3 检测试剂。室温孵育过夜后，记录 HTRF 信号。

简化通路

AKT 简化通路

AKT（或蛋白激酶 B）在调控细胞存活与凋亡中起关键作用。这种丝氨酸 / 苏氨酸蛋白激酶受胰岛素及多种生长和存活因子调控，通过依赖渥曼青霉素（wortmannin）的通路发挥作用，该通路涉及 PI3 激酶。当 AKT 的 plekstrin 同源（PH）结构域与磷酸肌醇结合后，AKT 可被两种激酶磷酸化：PDK1 在苏氨酸 308 位磷酸化，mTORC2（哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体 2）在丝氨酸 473 位磷酸化，进而激活 AKT。

规格参数

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰类型：总蛋白（Total）
产品类别：试剂盒（Kit）
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
靶标物种：人类
技术原理：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：神经科学
单位规格：50,000 个检测点

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货号：63ADK083PEY

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