HTRF NDRG1 TOTAL KIT - 50K PTS

概述

总NDRG1试剂盒可作为HTRF磷酸化NDRG检测试剂盒的归一化检测工具。在常与侵袭性肿瘤进展相关的缺氧条件下，HIF1-α会上调NDRG1的表达。NDRG1是一种转移抑制因子，通过阻断血管生成信号通路发挥作用。工作原理

总NDRG1检测原理 总NDRG1检测可定量细胞裂解物中NDRG1的表达水平。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总NDRG1检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在NDRG1时，加入这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团接近，从而产生FRET信号。信号强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比，且该检测采用无需洗涤的格式，为评估蛋白质表达水平提供了便利。 总ERK检测的HTRF原理 总NDRG1双板检测方案 双板方案包括：先在96孔板中培养细胞，然后进行裂解，再将裂解物转移至384孔小体积检测板中，之后加入总NDRG1 HTRF检测试剂。该方案能够监测细胞活力和汇合度。 HTRF总BRD2检测的双板方案 总NDRG1单板检测方案 使用HTRF试剂检测总NDRG1可在单个板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的HTRF检测质量。 HTRF总BRD2检测的单板方案 检测验证 在HeLa细胞上检测磷酸化和总NDRG1 将不同密度的HeLa细胞接种到96孔板中，过夜孵育。用25 µL不同浓度的AZD8055（一种新型ATP竞争性mTOR抑制剂）刺激细胞，在37°C、5% CO₂条件下孵育2小时。刺激后，用25 µL 4X裂解缓冲液裂解细胞，在室温下轻轻振荡30分钟。将16 µL裂解物转移至384孔白色小体积微孔板中，并加入4 µL HTRF磷酸化NDRG1（Thr346）或总NDRG1检测试剂。室温孵育过夜后记录HTRF信号。 在HeLa细胞上检测总NDRG1 将不同密度（100K、50K、25K和12.5K）的HeLa细胞以50 µL体积接种到96孔板中，在40 µM Dp44mT存在下孵育24小时。然后，吸出培养基，用50 µL 1X裂解缓冲液裂解细胞，在室温下轻轻振荡30分钟。将16 µL裂解物转移至384孔白色小体积微孔板中，并加入4 µL HTRF总NDRG1检测试剂。室温孵育过夜后记录HTRF信号。规格参数

其他规格 应用领域 细胞信号传导 品牌 HTRF 检测方式 HTRF 分子修饰类型 总蛋白 产品类别 试剂盒 样品体积 16 µL 运输条件 干冰运输 目标类别 磷酸化蛋白 技术原理 时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET） 治疗领域 肿瘤学与炎症 单位规格 50,000个检测点