HTRF AKT P-S473 KIT - 50K PTS

概述

磷酸化AKT（Ser473）试剂盒旨在稳健且高效地监测所有亚型在Ser473位点的AKT磷酸化情况，以此作为PI3K通路激活的读数指标。AKT也被称为蛋白激酶B（PKB），是一种癌基因，可调控细胞凋亡、细胞增殖、转录、细胞迁移和葡萄糖代谢。工作原理

磷酸化AKT（Ser473）检测原理 磷酸化AKT（Ser473）检测可对Ser473位点磷酸化的AKT进行测量。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。磷酸化AKT（Ser473）检测使用两种标记抗体：一种带有供体荧光团，另一种带有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能不依赖蛋白质的磷酸化状态对其进行识别。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生FRET信号。该信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，为在无需洗涤的检测格式下评估蛋白质磷酸化状态提供了一种方法。 磷酸化AKT（Ser473）双板检测方案 双板方案包括先在96孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至384孔小体积检测板，然后加入磷酸化AKT（Ser473）检测HTRF检测试剂。此方案能够监测细胞活力和汇合度。 磷酸化AKT（Ser473）单板检测方案 使用HTRF试剂检测磷酸化AKT（Ser473）可在同一板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳健的HTRF质量。检测验证

磷酸化AKT（Ser473）检测：IGF对HEK 293细胞的剂量反应 使用3种细胞密度（每孔12,500、25,000、50,000个细胞）接种HEK细胞后得到的结果。细胞饥饿24小时后，用不同浓度的IGF刺激10分钟。采用双板检测方案，在3.5小时后测量磷酸化AKT的水平。 总AKT用于控制AKT（Ser473）的磷酸化状态 采用磷酸化AKT（Ser473）和总AKT检测的双板方案，将HEK293细胞（100,000个细胞/孔）用IGF-1激活10分钟。正如预期，结果显示在IGF-1刺激下，AKT磷酸化呈剂量反应性增加，而AKT的表达水平保持恒定。 简化通路 AKT简化通路 AKT（或蛋白激酶B）在控制细胞存活和凋亡中起着关键作用。这种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶受胰岛素以及各种生长和存活因子的调控，在涉及PI3激酶的渥曼青霉素敏感通路中发挥作用。当AKT的PH（Pleckstrin同源）结构域与磷酸肌醇结合后，AKT可被两种不同的激酶磷酸化：PDK1在苏氨酸308位点磷酸化，mTORC2（雷帕霉素的哺乳动物靶标）在丝氨酸473位点磷酸化，进而激活AKT。规格参数

其他规格 应用领域 细胞信号传导 品牌 HTRF 检测方式 HTRF 分子修饰 磷酸化 产品类别 试剂盒 样品体积 16 µL 运输条件 干冰运输 靶标类别 磷酸化蛋白 靶标物种 人 技术 时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET） 单位规格 50,000个检测点