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HTRF AKT P-T308 KIT - 50K PTS

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概述

磷酸化 AKT（Thr308）试剂盒旨在对所有亚型中 Thr308 位点磷酸化的 AKT 调控进行稳健定量。AKT 也被称为蛋白激酶 B（PKB），是一种癌基因，在调控细胞凋亡、细胞增殖、转录、细胞迁移和葡萄糖代谢中发挥关键作用。

工作原理

磷酸化 AKT（Thr308）检测原理
磷酸化 AKT（Thr308）检测可测量在 Thr308 位点发生磷酸化的 AKT。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板，无需凝胶、电泳或转膜步骤。磷酸化 AKT（Thr308）检测使用两种标记抗体：一种带有供体荧光团，另一种带有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能不依赖蛋白质的磷酸化状态识别该蛋白质。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且无需洗涤步骤即可评估蛋白质的磷酸化状态。

磷酸化 AKT（Thr308）双板检测方案
双板方案包括先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，再加入磷酸化 AKT（Thr308）检测 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞活力和汇合度。

磷酸化 AKT（Thr308）单板检测方案
使用 HTRF 试剂检测磷酸化 AKT（Thr308）可在单个平板中完成，该平板可用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测验证
CHO-M1 细胞上磷酸化 AKT（Thr308）的 IGF 剂量反应
在 CHO 细胞上获得的结果，采用两种细胞密度接种（每孔 25,000 - 50,000 个细胞）。饥饿处理 24 小时后，用不同浓度的 IGF 刺激细胞 10 分钟。3.5 小时后，采用双板检测方案测量 Thr308 位点磷酸化的 AKT。

简化通路
AKT 简化通路
AKT（或蛋白激酶 B）在调控细胞存活和凋亡中起关键作用。这种丝氨酸 / 苏氨酸蛋白激酶受胰岛素及多种生长和存活因子调控，在涉及 PI3 激酶的渥曼青霉素敏感通路中发挥作用。当 AKT 的 plekstrin 同源（PH）结构域与磷酸肌醇结合时，AKT 可被两种不同的激酶磷酸化：PDK1 在苏氨酸 308 位点磷酸化，mTORC2（雷帕霉素的哺乳动物靶标）在丝氨酸 473 位点磷酸化，从而激活 AKT。

规格参数

其他规格
应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化、肿瘤学与炎症
单位规格：50,000 个检测点

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货号：64AKTPEY

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