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HTRF CRAF P-S43 KIT - 500 PTS

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品牌： Revvity

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概述

磷酸化 c-RAF（Ser43）细胞检测试剂盒旨在通过简化的混合读取、无需洗涤的流程，直接对 Ser-43 位点磷酸化的 cRaf 进行可靠定量。cRaf 在细胞增殖和分化中起着关键作用。该试剂盒可用于从基础研究到高通量药物筛选等多个领域。其多功能性使其适用于多种应用场景，涵盖基础研究、细胞模型中的药理学问题分析，以及肿瘤学和传染病研究等领域。

工作原理

磷酸化 c-RAF（Ser43）检测原理

磷酸化 c-RAF（Ser43）检测用于测量 Ser43 位点磷酸化的 c-RAF。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。磷酸化 c-RAF（Ser43）检测使用两种标记抗体：一种标记有供体荧光团，另一种标记有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能独立于蛋白质的磷酸化状态识别该蛋白质。蛋白质磷酸化会形成涉及两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，并在免洗涤的检测形式下为评估蛋白质的磷酸化状态提供了方法。

phospho-cRaf-cellular-kit（磷酸化 cRaf 细胞试剂盒）

磷酸化 c-RAF（Ser43）双板检测方案

双板方案包括先在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解，再将裂解物转移至 384 孔小体积检测板中，之后添加磷酸化 c-RAF（Ser43）HTRF 检测试剂。通过该方案可监测细胞的活力和汇合度。

phospho-cRaf-cellular-kit（磷酸化 cRaf 细胞试剂盒）

磷酸化 c-RAF（Ser43）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 c-RAF（Ser43）可在单个板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现检测微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

phospho-cRaf-cellular-kit（磷酸化 cRaf 细胞试剂盒）

检测验证

在 TPA 刺激的 HeLa 细胞中检测总 c-RAF 和磷酸化 c-RAF（S43）

将 HeLa 细胞以 100 µl 的量接种到 96 孔板中（100,000 个细胞 / 孔），使用完全培养基，在 37°C、5% CO₂条件下孵育过夜。次日，移除培养基，加入 50 µl 无血清培养基，在 37°C、5% CO₂条件下使细胞饥饿 5 小时。然后，用 50 µl 不同浓度的 TPA 在 37°C、5% CO₂条件下处理细胞 15 分钟。

移除培养基后，用 50 µL 补充的 2 号裂解缓冲液在室温下轻轻振荡 30 分钟以裂解细胞，将 16 µL 裂解物转移到小体积白色微孔板中，然后加入 4 µL 预混合的 HTRF 磷酸化 cRaf（Ser43）或总 cRaf 检测试剂。过夜孵育后记录 HTRF 信号。

phospho-cRaf-cellular-kit（磷酸化 cRaf 细胞试剂盒）

在 TPA 刺激的 HEK293T 细胞中检测总 c-RAF 和磷酸化 c-RAF（S43）

将 HEK293T 细胞以 100 µl 的量接种到 96 孔板中（100,000 个细胞 / 孔），使用完全培养基，在 37°C、5% CO₂条件下孵育过夜。次日，移除培养基，加入 50 µl 无血清培养基，在 37°C、5% CO₂条件下使细胞饥饿 5 小时。然后，用 50 µl 不同浓度的 TPA 在 37°C、5% CO₂条件下处理细胞 15 分钟。

移除培养基后，用 50 µL 补充的 2 号裂解缓冲液在室温下轻轻振荡 30 分钟以裂解细胞，将 16 µL 裂解物转移到小体积白色微孔板中，然后加入 4 µL 预混合的 HTRF 磷酸化 cRaf（Ser43）或总 cRaf 检测试剂。过夜孵育后记录 HTRF 信号。

phospho-cRaf-cellular-kit（磷酸化 cRaf 细胞试剂盒）

简化通路

RSK1 的功能与调节

RAF 原癌基因丝氨酸 / 苏氨酸蛋白激酶（c-RAF）是 MAP 激酶通路的一部分，它将上游效应因子 Ras 与下游的 MAPK/ERK 级联反应连接起来。因此，它在细胞命运决定中发挥作用，包括增殖、分化、凋亡、存活和致癌转化。

c-RAF 可通过 PKC 的直接或间接作用使 Ser338 磷酸化而被激活，也可被 GTP 结合的 Ras 直接激活。通过 MAPK/ERK 依赖性反馈使 Ser43 磷酸化可确保其失活。

phospho-cRaf-cellular-kit（磷酸化 cRaf 细胞试剂盒）

规格

其他规格

应用：细胞信号传导
自动化兼容性：是
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容的裂解缓冲液：1 号裂解缓冲液、2 号裂解缓冲液
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
靶标物种：人
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：心血管、代谢 / 糖尿病、肿瘤学与炎症
单位规格：500 个检测点

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货号：64CRAFS43PEG

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