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概述

磷酸化 CREB（S133）试剂盒最适用于定量检测在 S133 位点发生磷酸化的环磷酸腺苷应答元件结合蛋白，从而能够结合细胞中 CREB 的稳态水平来检测其磷酸化状态。CREB 作为一种转录因子，在 MAPK/ERK 下游传递信号，并可被多种通路激活，如 MAPK/ERK 通路、PI3K/AKT 通路和应激信号通路。CREB 在促进神经元可塑性、认知能力、细胞增殖、存活以及葡萄糖稳态方面发挥着关键作用。

工作原理
磷酸化 CREB（S133）检测原理
磷酸化 CREB（S133）检测用于测量在 S133 位点发生磷酸化的 CREB。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。磷酸化 CREB（S133）检测使用两种标记抗体：一种标记有供体荧光团，另一种标记有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能不依赖蛋白质的磷酸化状态对其进行识别。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号的强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接相关，且在无需洗涤的检测形式下，为评估蛋白质的磷酸化状态提供了一种方法。

磷酸化 CREB（S133）双板检测方案
双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解，接着将裂解物转移至 384 孔小体积检测板中，之后再加入磷酸化 CREB（S133）HTRF 检测试剂。此方案能够监测细胞的活力和汇合度。

磷酸化 CREB（S133）单板检测方案
使用 HTRF 试剂检测磷酸化 CREB（S133）可在同一板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测验证
葡萄糖剂量反应：对 Min6 细胞进行总 CREB 和磷酸化 CREB 检测
将小鼠胰腺 β 细胞 Min6 以每孔 70K 个细胞的密度接种到经培养处理的 96 孔板中，在 37°C、5% CO₂的完全培养基中培养 6 天。用 KRB（克雷布斯 - 林格缓冲液）洗涤细胞后，在 KRB 中静置 2 小时，随后用 50µL KRB 和浓度递增的葡萄糖在 37°C 下刺激细胞 5 分钟。裂解孵育 30 分钟后，采用双板检测方案对总 CREB 和磷酸化 CREB 进行检测。

佛司可林对 NIH 3T3 细胞的剂量反应
将小鼠 NIH 3T3 细胞（50,000 个细胞 / 孔）用不同浓度的佛司可林在 37°C 下刺激 30 分钟。裂解孵育 30 分钟后，采用双板检测方案对磷酸化 CREB 进行检测。

使用磷酸化 CREB 试剂盒检测厄洛替尼对 A431 细胞的抑制作用
将 A431 细胞（100,000 个细胞 / 孔）与不同浓度的拮抗剂在 37°C 下孵育 30 分钟，然后加入激动剂（表皮生长因子，EGF）并孵育 10 分钟。裂解孵育 30 分钟后，采用双板检测方案对磷酸化 CREB 进行检测。

HTRF 与蛋白质印迹法（WB）检测磷酸化 CREB 的对比
培养 800 万个 Hek293 细胞，并用 50µM 佛司可林刺激。细胞裂解后，收集可溶性组分并离心。用补充的裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，取 16µL 各稀释液，同时采用蛋白质印迹法和 HTRF 进行分析。HTRF 磷酸化 CREB（Ser133）检测与蛋白质印迹法具有同等水平的灵敏度。

简化通路
CREB 简化通路
CREB 是一种碱性亮氨酸拉链（bZIP）家族的细胞转录因子，可通过环磷酸腺苷应答元件激活转录。CREB 能够介导多种生理刺激产生的信号，从而调控大量的细胞反应。CREB 在促进神经元活动中起着关键作用。此外，CREB 信号还参与学习和记忆、细胞增殖与存活、葡萄糖稳态、精子发生以及昼夜节律等过程。CREB 可通过多种信号通路（包括细胞外调节激酶（Erk）、钙离子（Ca²⁺）和应激信号通路）在 Ser133 位点发生磷酸化而被激活。参与 CREB 的 Ser133 位点磷酸化的激酶包括 p90 核糖体 S6 激酶（p90RSK）、有丝分裂原和应激激活激酶（MSK）、钙调蛋白依赖性激酶 IV（CaMKIV）、蛋白激酶 A（PKA）以及丝裂原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶 2（MAPKAPK-2）等。

规格

其他规格
应用领域
细胞信号传导
品牌
HTRF
检测方式
HTRF
分子修饰
磷酸化
产品类别
试剂盒
样品体积
16µL
运输条件
干冰运输
目标类别
磷酸化蛋白
目标物种
人
小鼠
技术
时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域
代谢 / 糖尿病
非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化
肿瘤学与炎症
单位规格
50,000 个检测点

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HTRF CREB P-S133 KIT - 50K PTS