当前位置：首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Phosphoproteins > HTRF (H) CYCLIN E1 TOTAL KIT - 500 PTS HTRF人源总细胞周期蛋白 E1检测试剂盒，500测试

/

HTRF (H) CYCLIN E1 TOTAL KIT - 500 PTS HTRF人源总细胞周期蛋白 E1检测试剂盒，500测试

分享给好友

下载产品资料

rvty_ls_sds_64CYCE1TPEG_US rvty_ls_sds_64CYCE1TPEG_UK rvty_ls_sds_64CYCE1TPEG_SPA rvty_ls_sds_64CYCE1TPEG_ITA rvty_ls_sds_64CYCE1TPEG_ELL rvty_ls_sds_64CYCE1TPEG_DEU rvty_ls_sds_64CYCE1TPEG_FRA

品牌： Revvity

产品详情
相关解决方案
相关资源
相关视频
相关问答

概述

E 型细胞周期蛋白在静止细胞向细胞周期转换过程中发挥重要作用。已知的 E 型细胞周期蛋白有两种，即细胞周期蛋白 E1（Cyclin E1）和细胞周期蛋白 E2（Cyclin E2）。细胞周期蛋白 E1 可激活 CDK2，诱导 S 期转换以及与有丝分裂相关的 DNA 合成。细胞周期蛋白 E1 的过表达与多种癌症直接相关。

该试剂盒与总 CDK2 和磷酸化 CDK2 试剂盒（货号 64CDK2TPEG 和 64CDK2Y15PEG）的缓冲液兼容，因此同一份裂解物可用于分析总细胞周期蛋白 E1、总 CDK2 和酪氨酸 15 磷酸化 CDK2 的水平。

工作原理

总细胞周期蛋白 E1 检测原理

总细胞周期蛋白 E1 检测可对细胞裂解物中细胞周期蛋白 E1 的表达水平进行定量。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总细胞周期蛋白 E1 检测使用两种标记抗体，一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对该蛋白质上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在细胞周期蛋白 E1 时，加入这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中该蛋白质的浓度直接成正比，并在免洗涤的检测形式下为评估蛋白质的表达水平提供了方法。

human-total-cyclin-e1-detection-kit

总细胞周期蛋白 E1 双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至小体积检测板，再加入总细胞周期蛋白 E1 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

human-total-cyclin-e1-detection-kit

总细胞周期蛋白 E1 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总细胞周期蛋白 E1 可在单个用于培养、处理和裂解的培养板中完成，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化操作，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

human-total-cyclin-e1-detection-kit

检测验证

使用羟基脲（Hydroxyurea）和阿非迪霉素（Aphidicolin）上调总细胞周期蛋白 E1

将 HeLa 细胞接种到 96 孔板中（100,000 个细胞 / 孔），培养 6 小时，然后用不同浓度的羟基脲（单链断裂诱导剂）或阿非迪霉素（细胞周期阻滞剂）处理过夜。细胞裂解后，将 16 µL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，并加入 4 µL HTRF 总细胞周期蛋白 E1 检测抗体。孵育 3 小时后记录 HTRF 信号。

如预期所示，在羟基脲或阿非迪霉素存在时，总细胞周期蛋白 E1 的水平升高。

human-total-cyclin-e1-detection-kit

human-total-cyclin-e1-detection-kit

使用诺考达唑（Nocodazole）抑制总细胞周期蛋白

将 HeLa 细胞以 100,000 个细胞 / 孔的密度接种到含完全培养基的 96 孔培养处理板中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 6 小时。随后，用不同浓度的诺考达唑处理细胞 16 小时，然后用 50 µL 补充的 2 号裂解缓冲液（1X）在室温下轻轻振荡 30 分钟裂解细胞。检测时，将 16 µL 细胞裂解物转移至小体积白色微孔板中，并加入 4 µL 总细胞周期蛋白 E1 检测试剂。孵育 3 小时后记录 HTRF 信号。

用诺考达唑（细胞周期阻滞剂）处理细胞后，细胞中细胞周期蛋白 E1 的含量呈剂量依赖性降低。

ATPlite™检测显示 ATP 水平保持稳定，表明诺考达唑处理对细胞增殖或活力无影响。

human-total-cyclin-e1-detection-kit

human-total-cyclin-e1-detection-kit

通过 siRNA 实验验证 HTRF 人总细胞周期蛋白 E1 检测的特异性

将 HeLa 细胞接种到 96 孔板中（50,000 个细胞 / 孔），培养 24 小时。然后用针对细胞周期蛋白 E1 和细胞周期蛋白 E2 的特异性 siRNA 以及阴性对照 siRNA 转染细胞。

孵育 48 小时后，裂解细胞，将 16 µL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，然后加入 4 µL HTRF 总细胞周期蛋白 E1 检测抗体。孵育 3 小时后记录 HTRF 信号。

与转染阴性对照 siRNA 的细胞相比，转染细胞周期蛋白 E1 siRNA 的细胞信号降低了 80%。转染细胞周期蛋白 E2 siRNA 的细胞未观察到信号降低。这些数据表明，HTRF 总细胞周期蛋白 E1 检测对细胞周期蛋白 E1 的检测具有特异性，且不会与细胞周期蛋白 E2 发生交叉反应。

human-total-cyclin-e1-detection-kit

HTRF 人总细胞周期蛋白 E1 检测在人细胞系中的通用性

将贴壁的人细胞系 HeLa、MCF7、U20S 或 HAP1 细胞以 100,000 个细胞 / 孔的密度接种到 96 孔微孔板中。孵育 24 小时后，用补充的裂解缓冲液裂解细胞，将 16 µL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，然后加入 4 µL HTRF 总细胞周期蛋白 E1 检测试剂。孵育 3 小时后记录 HTRF 信号。

HTRF 总细胞周期蛋白 E1 检测能有效检测多种表达不同水平该蛋白的细胞模型中的细胞周期蛋白 E1。

human-total-cyclin-e1-detection-kit

HTRF 总细胞周期蛋白 E1 检测与蛋白质印迹法（WB）的比较

将 U2OS 细胞在 T175 培养瓶中用完全培养基在 37°C、5% CO₂条件下培养。孵育 48 小时并移除细胞培养基后，用 3 mL 补充的 2 号裂解缓冲液（1X）在室温下轻轻振荡 30 分钟裂解细胞。

用补充的 2 号裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，将 16 µL 各稀释液转移至小体积白色微孔板中，然后加入 4 µL HTRF 总细胞周期蛋白 E1 检测试剂。

取等量裂解物进行 HTRF 和蛋白质印迹法的平行比较。

在该条件下，HTRF 总细胞周期蛋白 E1 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 16 倍。

human-total-cyclin-e1-detection-kit

简化通路

细胞周期蛋白 E1 信号通路

细胞周期蛋白通过其定时表达以及结合、激活相关细胞周期蛋白依赖性激酶（CDKs）并增强其底物亲和力的能力，在细胞分裂周期的有序进行中发挥关键作用。细胞周期蛋白 E1 和细胞周期蛋白 E2 是细胞周期蛋白依赖性激酶 2（CDK2）的激活剂。在哺乳动物细胞中，有丝分裂原刺激下 CDK4 或 CDK6 与 D 型细胞周期蛋白结合形成的复合物在 G1 期促进细胞周期蛋白 E 的转录，并激活 CDK2 / 细胞周期蛋白 E 激酶活性。在 S 期，细胞周期蛋白 E 的水平下降，这是由于自身磷酸化及其他磷酸化事件使其被泛素化并通过蛋白酶体降解。细胞周期蛋白 E1 在 DNA 复制起始、组蛋白生物合成调控及中心体周期中直接发挥作用。细胞周期蛋白 E1 与多种恶性肿瘤的疾病进展相关，且在临床上与不良预后相关。

pathway-total-cyclin-E1-64cyce1tpeg-64cyce1tpe-64cyce1tpey.svg

规格

其他规格

应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容的裂解缓冲液：1 号裂解缓冲液、2 号裂解缓冲液、3 号裂解缓冲液、4 号裂解缓冲液
分子修饰：总量
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
靶标物种：人
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
单位规格：500 个检测点

没有数据

没有数据

货号：64CYCE1TPEG

一键复制

参考价格 ¥ 29723.99

产品规格

1盒/500测试￥29723.99

参考货期：3-4周

选择数量

当前规格1件起购

加入购物车询价

相关靶点蛋白推荐

上海普纳生物技术有限公司