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HTRF EIF4E P-S209 KIT - 50K PTS

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概述

磷酸化 EIF4E（Ser209）细胞检测试剂盒可直接在目标细胞类型中测量内源性 EIF4E 蛋白在 Ser209 位点的磷酸化水平。EIF4E 能促进与细胞增殖、血管生成和细胞存活相关的关键基因的表达。EIF4E 的调控在代谢 / 糖尿病、神经科学和肿瘤学研究中均有应用。

工作原理

磷酸化 EIF4E（Ser209）检测原理

磷酸化 EIF4E（Ser209）检测可对 Ser209 位点磷酸化的 EIF4E 进行测量。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。此检测采用两种标记抗体：一种标记有供体荧光团，另一种标记有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能不依赖蛋白质的磷酸化状态识别该蛋白质。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接相关，且无需洗涤步骤即可评估蛋白质的磷酸化状态。

磷酸化 EIF4E（Ser209）双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解，接着将裂解物转移至 384 孔低体积检测板，之后再加入磷酸化 EIF4E（Ser209）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

磷酸化 EIF4E（Ser209）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 EIF4E（Ser209）可在单个培养板中完成，该培养板同时用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测验证

蛋白质印迹法与 HTRF 检测的对比

将 HEK293 细胞在 T175 培养瓶中培养 1 天，直至达到 80% 汇合度。裂解并离心后，取等量的系列稀释裂解物，通过蛋白质印迹法和 HTRF 进行平行对比分析。结果表明，HTRF 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 8 倍。

CGP57380 在 NIH3T3 细胞上的剂量反应

将小鼠 NIH3T3 细胞（50,000 个细胞 / 孔）与不同浓度的 CGP57380 抑制剂孵育 3 小时。裂解孵育 30 分钟后，采用双板方案的 HTRF 磷酸化 EIF4E（Ser209）检测来测量 EIF4E 磷酸化的抑制情况。

CGP57380 在受刺激的 HeLa 细胞上的剂量反应

将人 HeLa 细胞（100,000 个细胞 / 孔）与不同浓度的 CGP57380 抑制剂孵育（30 分钟或 3 小时），随后用 10μM 茴香霉素在 37°C 下刺激 30 分钟。裂解孵育 30 分钟后，采用双板方案的 HTRF 磷酸化 EIF4E（Ser209）检测来测量 EIF4E 磷酸化的抑制情况。

简化通路

EIF4E 的简化通路

EIF4E（真核翻译起始因子 4E）通过结合 mRNA 帽结构的 5' 端并引导其与核糖体结合，从而启动真核生物蛋白质合成。EIF4E 能促进细胞周期蛋白、c-myc 和血管内皮生长因子等关键基因的表达，这些基因参与细胞增殖、血管生成和细胞存活。Ser209 位点磷酸化的 EIF4E 过表达与肿瘤发生、转移以及多种癌症的总体生存率低下相关，使其成为一个新的研究靶点。

规格参数

其他规格

应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人、小鼠
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：肿瘤学与炎症
单位规格：50,000 个检测点

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货号：64EF4PEY

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