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HTRF EGFR P-Y1068 KIT - 10K PTS 磷酸化EGFR(Y1068)检测试剂盒 - 10,000测试

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概述

磷酸化表皮生长因子受体（EGFR）检测试剂盒旨在基于细胞对 EGFR 上的 Tyr1068 磷酸化进行定量检测。导致 EGFR（也称为 ErbB1 或 HER1）过表达或过度激活的突变与多种癌症相关，如肺癌、结直肠癌、前列腺癌、胶质母细胞瘤等。这使得 EGFR 成为抗癌治疗相关免疫检测的关键靶点。

工作原理

磷酸化 EGFR（Tyr1068）检测原理

磷酸化 EGFR（Tyr1068）检测用于测定在 Tyr1068 位点发生磷酸化的 EGFR。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。磷酸化 EGFR（Tyr1068）检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能独立于磷酸化状态识别该蛋白质。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号的强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且能在无需洗涤的检测格式下评估蛋白质的磷酸化状态。

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磷酸化 EGFR（Tyr1068）双板检测方案

双板方案包括先在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解，接着将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，之后再加入磷酸化 EGFR（Tyr1068）均相时间分辨荧光（HTRF）检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

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磷酸化 EGFR（Tyr1068）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 EGFR（Tyr1068）可在单个用于培养、刺激和裂解的培养板中进行，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

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检测验证

HTRF 磷酸化 EGFR（Tyr1068）检测与蛋白质印迹法（WB）的比较

将人 A431 细胞培养 48 小时，用 100ng 表皮生长因子（EGF）刺激 10 分钟。裂解后，通过离心收集可溶性组分。用补充的裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，取 16μL 各稀释液分别通过蛋白质印迹法和 HTRF 进行平行分析。使用 HTRF 磷酸化 EGFR（Tyr1068）检测时，仅需 100 个细胞即可检测到最低信号，而蛋白质印迹法需要 3120 个细胞才能产生信号。HTRF 磷酸化 EGFR 检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 30 倍，且相关性良好。

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多种人类肿瘤细胞系中磷酸化 EGFR 的调控

将人 BxPC3 细胞（图 1；绿色）、SKOV3 细胞（图 2；紫色）、CRC1 细胞（图 3）和 A431 细胞（图 4；粉色）接种在 96 孔板中，在 37°C、5% 二氧化碳条件下孵育 24 小时。用浓度递增的激动剂孵育 10 分钟后，移除培养基，用 50μL 裂解缓冲液在室温下轻轻摇晃 30 分钟以裂解细胞。将 16μL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，加入 4μL HTRF 磷酸化 EGFR 检测试剂。过夜孵育后记录 HTRF 信号。

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使用磷酸化（Tyr1068）和总 EGFR 试剂盒测量抑制效果

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简化通路

EGFR（表皮生长因子受体）信号传导简化通路

EGFR 是一种属于 ErbB 家族的受体酪氨酸激酶。EGFR 配体的结合会促使受体发生同源二聚化或异源二聚化，进而激活 EGFR 的酪氨酸激酶结构域和特定的酪氨酸残基。

磷酸化的酪氨酸残基随后会为多种因子提供停靠位点，这些因子会诱导多个信号转导级联反应的下游激活。

从 EGF 受体传递至细胞核的信号会调控多种生物学功能，如细胞增殖、分化、存活、黏附、迁移和血管生成。

导致 EGFR 过表达或过度激活的突变与多种癌症相关，这使得 EGFR 成为抗癌治疗的关键靶点。

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规格

其他规格

应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容的裂解缓冲液：3 号裂解缓冲液、4 号裂解缓冲液、5 号裂解缓冲液
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16μL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
靶标物种：人
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：肿瘤学与炎症
单位规格：10,000 个检测点

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货号：64EG1PEH

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