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HTRF (H) H2AX TOTAL KIT - 500 PTS 人总组蛋白H2AX检测试剂盒，500测试

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概述

总 H2AX 试剂盒可对人组蛋白变体 H2AX 进行定量检测。当双链 DNA 断裂时（无论是由于电离辐射还是内源性生理过程），H2AX 的 Ser139 位点可能会发生特异性磷酸化。这种修饰被称为 γ-H2AX（磷酸化 Ser139），会触发细胞周期停滞和 DNA 损伤反应修复，因此该检测特别适用于研究基因组稳定性、细胞周期、DNA 修复，更广泛地说，还可作为癌症和衰老过程研究的生物标志物。

工作原理

总 H2AX 检测原理

总 H2AX 检测用于定量细胞裂解物中 H2AX 的表达水平。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 H2AX 检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对该蛋白上的不同表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 H2AX 时，添加这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号强度与样品中 H2AX 的浓度直接成正比，且能在无需洗涤的检测形式下评估该蛋白的表达水平。

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总 H2AX 双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，再加入总 H2AX HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

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总 H2AX 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 H2AX 可在单个用于培养、刺激和裂解的培养板中进行，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化操作，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

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检测验证

使用新制癌菌素化合物的药理学验证

将 HEK293 细胞在 96 孔板中（12,500 个细胞 / 孔）于 37°C、5% CO₂条件下培养 24 小时。移除细胞培养基后，用浓度递增的新制癌菌素（DNA 损伤剂）处理细胞。孵育 30 分钟后，移除细胞培养基，向每个孔中加入 50 µL 补充的 1X 裂解缓冲液 #4。细胞裂解 45 分钟后，将 16 µL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，并加入 4 µL HTRF 总 H2AX 或磷酸化 H2AX（Ser139）检测抗体。孵育 2 小时后记录 HTRF 信号。

新制癌菌素触发了磷酸化 H2AX（Ser139）蛋白的剂量依赖性增加，而 H2AX 的表达水平保持稳定。

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使用 H2AX 敲除细胞系验证 HTRF 总 H2AX 检测的特异性

使用 HTRF 总 H2AX 试剂盒在 HAP1 细胞（野生型）和 H2AX 敲除（KO）的 HAP1 细胞中评估人 H2AX 的表达水平。预先优化细胞密度，以确保 HTRF 检测在试剂盒的动态范围内进行（数据未显示）。

将这些细胞系在 96 孔板中（50,000 个细胞 / 孔）于 37°C、5% CO₂条件下培养 24 小时。移除培养基后，用 50 µL 补充的 1X 裂解缓冲液 #4 裂解细胞 45 分钟，然后将 16 µL 细胞裂解物转移至小体积白色微孔板中，随后加入 4 µL 预混合的检测试剂。在室温下孵育 2 小时后记录 HTRF 信号。

在 HAP1 H2AX 敲除细胞中，HTRF 信号与非特异性信号（虚线）相当，表明 H2AX 基因被完全沉默，同时也证明了 HTRF 总 H2AX 试剂盒的特异性。

HAP1 敲除细胞系来自 Horizon Discovery 公司，货号# HZGHC005630c003

HAP1 野生型来自 Horizon Discovery 公司，货号# C631

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规格

其他规格

应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容的裂解缓冲液：1 号裂解缓冲液、3 号裂解缓冲液、4 号裂解缓冲液
分子修饰：总蛋白
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
靶标物种：人
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
单位规格：500 个检测点

没有数据

货号：64H2AXTPEG

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