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HTRF H2AX P-S139 KIT - 50K PTS

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概述
磷酸化 H2AX（Ser139）试剂盒可对丝氨酸 139 位点磷酸化的组蛋白变体 H2AX 进行定量检测。当双链 DNA 断裂时（无论是由于电离辐射还是内源性生理过程），可能会发生这种特异性磷酸化。这种被称为 γ-H2AX（磷酸化 Ser139）的修饰会触发细胞周期停滞和 DNA 损伤应答修复，这使得该检测特别适用于研究基因组稳定性、细胞周期、DNA 修复，更广泛地说，还可作为癌症和衰老过程研究的生物标志物。

工作原理
磷酸化 H2AX（Ser139）检测原理
磷酸化 H2AX（Ser139）检测可测量在 Ser139 位点发生磷酸化的 H2AX。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板，无需凝胶、电泳或转膜步骤。磷酸化 H2AX（Ser139）检测使用两种标记抗体：一种带有供体荧光团，另一种带有受体荧光团。第一种抗体特异性识别蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则不依赖于蛋白质的磷酸化状态对其进行识别。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号的强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，并且在无需洗涤的检测形式下即可评估蛋白质的磷酸化状态。

磷酸化 H2AX 细胞试剂盒

磷酸化 H2AX（Ser139）双板检测方案
双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，然后裂解细胞，再将裂解物转移到 384 孔小体积检测板中，之后添加磷酸化 H2AX（Ser139）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

磷酸化 H2AX 细胞试剂盒

磷酸化 H2AX（Ser139）单板检测方案
使用 HTRF 试剂检测磷酸化 H2AX（Ser139）可在单个板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

磷酸化 H2AX 细胞试剂盒

检测验证
HTRF 磷酸化 H2AX 细胞检测与蛋白质印迹法的比较
将 HEK-293 细胞在 T175 培养瓶中培养至 80% 汇合度。然后裂解细胞培养物，并通过离心沉淀。用补充的裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，取 16 µL 每种稀释液，分别通过蛋白质印迹法和 HTRF 进行平行分析。结果发现，HTRF 细胞检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 16 倍。

磷酸化 H2AX 细胞试剂盒

新制癌菌素对 Jurkat 细胞的剂量反应
将 25,000 个人 Jurkat 细胞接种到 96 孔板中。在与不同浓度的新制癌菌素孵育 30 分钟后，用 10µL 4X 裂解缓冲液在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。将 16 µL 裂解物转移到 384 孔白色小体积微孔板中，并添加 4 µL HTRF 磷酸化 H2AX（Ser139）检测试剂。孵育过夜后记录 HTRF 信号。

磷酸化 H2AX 细胞试剂盒

Jurkat 细胞中磷酸化 H2AX（Ser139）激活：检测动力学
将 25,000 个人 Jurkat 细胞接种到 96 孔板中。在与不同浓度的新制癌菌素孵育 30 分钟后，用 10µL 4X 裂解缓冲液在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。将 16 µL 裂解物转移到 384 孔白色小体积微孔板中，并添加 4 µL HTRF 磷酸化 H2AX（Ser139）检测试剂。在不同的孵育时间点记录 HTRF 信号。

磷酸化 H2AX 细胞试剂盒

简化通路
磷酸化 H2AX（Ser139）细胞检测试剂盒简化通路
DNA 双链断裂（DSB）是最有害的 DNA 损伤类型，由内源性过程或外源性因素（如电离辐射、紫外线辐射、特定抗癌药物）引起。H2AX 是组蛋白 H2A 家族的一种变体，在发生双链断裂时会在 Ser139 位点发生磷酸化。这种修饰被称为 γ-H2AX，在数分钟内会扩散到损伤部位附近的数千个 H2AX 蛋白上。这对于激活 DNA 损伤应答通路至关重要，该通路是一种用于检测和修复 DNA 损伤的复杂分子机制。

磷酸化 H2AX 细胞试剂盒

规格

其他规格
应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
目标类别：磷酸化蛋白质
目标物种：人类
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：肿瘤学与炎症
单位规格：50,000 个检测点

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货号：64H2XPEY

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